Monstervoorbereiding voor in situ cryotomografie van zoogdiercellen

In situ cellulaire cryotomografie is een krachtige techniek voor het bestuderen van complexe objecten in hun oorspronkelijke bevroren-gehydrateerde cellulaire context, waardoor het zeer relevant is voor cellulaire biologie en virologie. Het potentieel van het combineren van cryotomografie met andere microscopiemodaliteiten maakt het een perfecte techniek voor integratieve en correlatieve beeldvorming. De monstervoorbereiding voor in situ cellulaire tomografie is echter niet eenvoudig, omdat cellen zich niet gemakkelijk hechten en zich uitstrekken over het elektronenmicroscopierooster. Bovendien zijn de roosters zelf kwetsbaar en kunnen ze breken als ze te krachtig worden gehanteerd, wat resulteert in het verlies van beeldbare gebieden. De geometrie van weefselkweekschaaltjes kan ook een uitdaging vormen bij het manipuleren van de roosters met een pincet. Hier beschrijven we de tips en trucs om deze (en andere) uitdagingen te overwinnen en monsters van goede kwaliteit voor te bereiden voor in situ cellulaire cryotomografie en correlatieve beeldvorming van aanhangende zoogdiercellen. Met de voortdurende vooruitgang in cryomicroscopietechnologie is deze techniek veelbelovend voor het bevorderen van ons begrip van complexe biologische systemen.