Préparation d’échantillons pour la cryotomographie in situ de cellules de mammifères

La cryotomographie cellulaire in situ est une technique puissante pour étudier des objets complexes dans leur contexte cellulaire natif congelé-hydraté, ce qui la rend très pertinente pour la biologie cellulaire et la virologie. Le potentiel de combiner la cryotomographie avec d’autres modalités de microscopie en fait une technique parfaite pour l’imagerie intégrative et corrélative. Cependant, la préparation des échantillons pour la tomographie cellulaire in situ n’est pas simple, car les cellules ne se fixent pas facilement et ne s’étirent pas sur la grille de microscopie électronique. De plus, les grilles elles-mêmes sont fragiles et peuvent se briser si elles sont manipulées avec trop de force, ce qui entraîne la perte de zones imageables. La géométrie des boîtes de culture tissulaire peut également poser un défi lors de la manipulation des grilles avec une pince à épiler. Nous décrivons ici les trucs et astuces pour surmonter ces défis (et d’autres) et préparer des échantillons de bonne qualité pour la cryotomographie cellulaire in situ et l’imagerie corrélative des cellules de mammifères adhérentes. Avec les progrès continus de la technologie de cryomicroscopie, cette technique est extrêmement prometteuse pour faire progresser notre compréhension des systèmes biologiques complexes.