Preparazione del campione per la criotomografia in situ di cellule di mammifero

La criotomografia cellulare in situ è una tecnica potente per lo studio di oggetti complessi nel loro contesto cellulare nativo congelato-idratato, il che la rende molto rilevante per la biologia cellulare e la virologia. Il potenziale di combinare la criotomografia con altre modalità di microscopia la rende una tecnica perfetta per l'imaging integrativo e correlativo. Tuttavia, la preparazione del campione per la tomografia cellulare in situ non è semplice, poiché le cellule non si attaccano e si allungano facilmente sulla griglia di microscopia elettronica. Inoltre, le griglie stesse sono fragili e possono rompersi se maneggiate con troppa forza, con conseguente perdita di aree visualizzabili. Anche la geometria delle piastre di coltura tissutale può rappresentare una sfida quando si manipolano le griglie con le pinzette. Qui, descriviamo i suggerimenti e i trucchi per superare queste (e altre) sfide e preparare campioni di buona qualità per la criotomografia cellulare in situ e l'imaging correlato di cellule di mammifero aderenti. Con i continui progressi nella tecnologia della criomicroscopia, questa tecnica è estremamente promettente per far progredire la nostra comprensione dei sistemi biologici complessi.