Prøvepreparering for in situ kryotomografi av pattedyrceller

In situ cellulær kryotomografi er en kraftig teknikk for å studere komplekse objekter i deres opprinnelige frosnehydrerte cellulære kontekst, noe som gjør den svært relevant for cellulær biologi og virologi. Potensialet for å kombinere kryotomografi med andre mikroskopimodaliteter gjør det til en perfekt teknikk for integrativ og korrelativ avbildning. Prøvepreparering for in situ cellulær tomografi er imidlertid ikke enkel, da celler ikke lett fester seg og strekker seg over elektronmikroskopigitteret. I tillegg er ristene selv skjøre og kan bryte hvis de håndteres for kraftig, noe som resulterer i tap av bildeområder. Geometrien til vevskulturskåler kan også utgjøre en utfordring når du manipulerer ristene med pinsett. Her beskriver vi tips og triks for å overvinne disse (og andre) utfordringer og forberede prøver av god kvalitet for in situ cellulær kryotomografi og korrelativ avbildning av adherente pattedyrceller. Med fortsatte fremskritt innen kryomikroskopiteknologi, holder denne teknikken enormt løfte om å fremme vår forståelse av komplekse biologiske systemer.