Preparo de Amostras para Criotomografia In Situ de Células de Mamíferos

A criotomografia celular in situ é uma técnica poderosa para estudar objetos complexos em seu contexto celular nativo congelado-hidratado, tornando-a altamente relevante para a biologia celular e virologia. O potencial de combinar a criotomografia com outras modalidades de microscopia a torna uma técnica perfeita para imagens integrativas e correlativas. No entanto, o preparo da amostra para a tomografia celular in situ não é simples, pois as células não se fixam prontamente e se estendem sobre a grade de microscopia eletrônica. Além disso, as próprias grades são frágeis e podem quebrar se manuseadas com muita força, resultando na perda de áreas imagináveis. A geometria das placas de cultura de tecidos também pode representar um desafio ao manipular as grades com pinças. Aqui, descrevemos as dicas e truques para superar esses (e outros) desafios e preparar amostras de boa qualidade para criotomografia celular in situ e imagens correlativas de células aderentes de mamíferos. Com os avanços contínuos na tecnologia de criomicroscopia, esta técnica é uma enorme promessa para o avanço da nossa compreensão de sistemas biológicos complexos.