Preparación de muestras para criotomografía in situ de células de mamíferos

La criotomografía celular in situ es una técnica poderosa para estudiar objetos complejos en su contexto celular nativo congelado-hidratado, lo que la hace muy relevante para la biología celular y la virología. El potencial de combinar la criotomografía con otras modalidades de microscopía la convierte en una técnica perfecta para la obtención de imágenes integrativas y correlativas. Sin embargo, la preparación de la muestra para la tomografía celular in situ no es sencilla, ya que las células no se adhieren ni se estiran fácilmente sobre la rejilla de microscopía electrónica. Además, las propias rejillas son frágiles y pueden romperse si se manipulan con demasiada fuerza, lo que provoca la pérdida de áreas visibles. La geometría de las placas de cultivo de tejidos también puede suponer un reto a la hora de manipular las rejillas con pinzas. Aquí, describimos los consejos y trucos para superar estos (y otros) desafíos y preparar muestras de buena calidad para criotomografía celular in situ e imágenes correlativas de células de mamíferos adherentes. Con los continuos avances en la tecnología de criomicroscopía, esta técnica es muy prometedora para avanzar en nuestra comprensión de los sistemas biológicos complejos.