Provberedning för in situ kryotomografi av däggdjursceller

In situ cellulär kryotomografi är en kraftfull teknik för att studera komplexa objekt i deras ursprungliga frysta hydratiserade cellulära sammanhang, vilket gör den mycket relevant för cellbiologi och virologi. Potentialen att kombinera kryotomografi med andra mikroskopimodaliteter gör det till en perfekt teknik för integrativ och korrelativ avbildning. Provberedning för in situ celltomografi är dock inte okomplicerad, eftersom celler inte lätt fäster och sträcker sig över elektronmikroskopinätet. Dessutom är själva rutnäten ömtåliga och kan gå sönder om de hanteras för kraftfullt, vilket resulterar i förlust av bildbara områden. Geometrin hos vävnadsodlingsskålar kan också utgöra en utmaning när man manipulerar gallren med pincett. Här beskriver vi tips och tricks för att övervinna dessa (och andra) utmaningar och förbereda prover av god kvalitet för in situ cellulär kryotomografi och korrelativ avbildning av vidhäftande däggdjursceller. Med fortsatta framsteg inom kryomikroskopiteknik är denna teknik enormt lovande för att främja vår förståelse av komplexa biologiska system.