Generering av njurorganoider i suspension från inducerade pluripotenta stamceller

Njurorganoider kan genereras från inducerade pluripotenta stamceller (iPSC) genom olika metoder. Dessa organoider är mycket lovande för sjukdomsmodellering, läkemedelsscreening och potentiella terapeutiska tillämpningar. Den här artikeln presenterar en steg-för-steg-procedur för att skapa njurorganoider från iPSC, från den bakre primitiva strimman (PS) till den intermediära mesodermen (IM). Tillvägagångssättet bygger på APEL 2-mediet, som är ett definierat, djurkomponentfritt medium. Det kompletteras med en hög koncentration av WNT-agonist (CHIR99021) under en period av 4 dagar, följt av fibroblasttillväxtfaktor 9 (FGF9)/heparin och en låg koncentration av CHIR99021 under ytterligare 3 dagar. Under denna process läggs tonvikten på att välja den optimala celltätheten och CHIR99021 koncentrationen i början av iPSCs, eftersom dessa faktorer är avgörande för framgångsrik generering av njurorganoider. En viktig aspekt av detta protokoll är suspensionskulturen i en platta med låg vidhäftning, vilket gör att IM gradvis kan utvecklas till nefronstrukturer, som omfattar glomerulära, proximala tubulära och distala tubulära strukturer, allt presenterat i ett visuellt begripligt format. Sammantaget erbjuder detta detaljerade protokoll en effektiv och specifik teknik för att producera njurorganoider från olika iPSC:er, vilket säkerställer framgångsrika och konsekventa resultat.