A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Данный протокол представляет собой стандартизированную мышиную модель расширения шовного материала и метод 3-D визуализации для изучения механобиологических изменений шва и ремоделирования кости при растягивающей силе.
Черепно-лицевые швы играют решающую роль, помимо того, что они являются фиброзными суставами, соединяющими черепно-лицевые кости; Они также служат основной нишей для роста костей черепа и лица, вмещая мезенхимальные стволовые клетки и остеопредшественники. Поскольку большинство черепно-лицевых костей развиваются путем внутренней мембранозной оссификации, краевые участки швов действуют как точки инициации. Из-за этой значимости эти швы стали интригующими мишенями в ортопедической терапии, такой как пружинное расширение свода черепа, быстрое расширение верхней челюсти и протрация верхней челюсти. Под действием ортопедической силы шовные стволовые клетки быстро активируются, становясь динамическим источником для ремоделирования кости во время расширения. Несмотря на их важность, физиологические изменения в периоды ремоделирования костной ткани остаются малоизученными. Традиционные методы секционирования, в первую очередь в сагиттальном направлении, не охватывают комплексных изменений, происходящих по всему шву. В этом исследовании была создана стандартная мышиная модель расширения сагиттального шва. Чтобы полностью визуализировать изменения ремоделирования костной ткани после расширения шва, метод очистки тканей PEGASOS был объединен с окрашиванием EdU и двойным мечением хелатированием кальция. Это позволило визуализировать высокопролиферирующие клетки и образование новой костной ткани по всей костной кости после расширения. Этот протокол предлагает стандартизированную мышиную модель расширения шовного материала и метод 3-D визуализации, проливающий свет на механобиологические изменения в швах и ремоделирование кости при растягивающей силе.
Черепно-лицевые швы представляют собой волокнистые ткани, которые соединяют черепно-лицевые кости и играют важную роль в росте и ремоделировании черепно-лицевых костей. Структура шва напоминает реку, обеспечивая приток клеточных ресурсов для питания и построения «берега реки», известного как остеогенные фронты, которые способствуют формированию черепно-лицевых костей посредством интрамембранозного остеогенеза1.
Интерес к черепно-лицевым швам был обусловлен клиническими потребностями в понимании преждевременного закрытия черепных швов и дисфункции лицевых швов, которые могут привести к черепно-ли....
Все экспериментальные процедуры, описанные здесь, были одобрены Комитетом по уходу за животными Шанхайской девятой народной больницы Шанхайской медицинской школы Университета Цзяо Тун (SH9H-2023-A616-SB). В этом исследовании использовались 4-недельные самцы мышей C57BL/6. Все используемые инстр?.......
С помощью этого протокола была создана мышиная модель расширения сагиттального шва (рис. 1-2). Для 3D-визуализации изменений при моделировании костей после наложения шва метод очистки тканей PEGASOS был применен ко всей пяточной кости после расширения. Посл.......
Мы применили стандартную мышиную модель расширения шва для наблюдения за регулярными морфологическими изменениями, которые происходят каждую неделю в течение всего месячногоцикла ремоделирования. Эта модель полезна для исследования ремоделирования и регенерации костн.......
Благодарим за лабораторную платформу и помощь Институт уха Шанхайского университета Цзяотун на медицинском факультете. Эта работа была поддержана Шанхайской программой Пуцзян (22PJ1409200); Национальный фонд естественных наук Китая (No 11932012); Научно-исследовательский фонд Шанхайской девятой народной больницы, Медицинский факультет Шанхайского университета Цзяотун; Финансирование программы фундаментальных исследований Девятой народной больницы при Медицинской школе Шанхайского университета Цзяотун (JYZZ154).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
37% Acid etching | Xihubiom | E10-02/1807011 | |
Alizarin red | Sigma-Aldrich | A3882 | |
AUSTRALIAN WIRE | A.J.WILCOCK | 0.014'' | |
Benzyl benzoate | Sigma-Aldrich | B6630 | |
Calcein green | Sigma-Aldrich | C0875 | |
Copper(II) sulfate, anhydrous | Sangon Biotech | A603008 | |
Dynamometer | Sanliang | SF-10N | |
EDTA | Sigma-Aldrich | E9884 | |
EdU | Invitrogen | E104152 | |
Laser Confocal Microscope | Leica | SP8 | |
PBS | Sangon Biotech | E607008 | |
PEG-MMA 500 | Sigma-Aldrich | 447943 | |
PFA | Sigma-Aldrich | P6148 | |
pH Meters | Mettler Toledo | S220 | |
Quadrol | Sigma-Aldrich | 122262 | |
Sodium Ascorbate | Sigma-Aldrich | A4034 | |
Sodium bicarbonate | Sangon Biotech | A500873 | |
Sodium chloride | Sangon Biotech | A610476 | |
Sodium hydroxide | Sigma-Aldrich | S5881 | |
Spring | TAOBAO | 0.2*1.5*1*7 | |
Sulfo-Cyanine3 azide | Lumiprobe | A1330 | |
tert-Butanol | Sigma-Aldrich | 360538 | Protect from light. Do not freeze. |
Transbond MIP Moisture Insensitive Primer | 3M Unitek | 712-025 | |
Transbond XT Light Cure Adhesive Paste | 3M Unitek | 712-035 | |
Triethanolamine | Sigma-Aldrich | V900257 | |
Tris-buffered saline | Sangon Biotech | A500027 |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved