İnsan Eksfoliye Edilmiş Yaprak Döken Dişlerden İmmünfenotipli Mezenkimal Kök Hücrelerin Tek Hücreli Sınıflandırılması

Bir organizmanın mezenkimal kök hücreleri (MSC'ler), vücuttaki birden fazla yetişkin hücre soyuna farklılaşmak için olağanüstü bir kapasiteye sahiptir ve immünomodülatör ve antienflamatuar özellikleri ile bilinir. Bu kök hücrelerin kullanımı, rejeneratif biyoloji alanı için bir nimettir, ancak aynı zamanda, bunlarla ilişkili çoklu hücresel belirsizlikler nedeniyle rejeneratif tıp ve terapötikler için bir felakettir. Bu belirsizlikler, bu kök hücrelerin kaynağındaki çeşitlilikten ve her ikisi de fonksiyonel heterojenliklerini yansıtan in vitro büyüme koşullarından kaynaklanabilir.

Bu, terapötik uygulamalar için saflaştırılmış, homojen MSC popülasyonları sağlamak için metodolojileri garanti eder. Akış sitometrisi alanındaki gelişmeler, multiparametrik bir yaklaşım kullanılarak tek hücreli popülasyonların saptanmasını sağlamıştır. Bu protokol, floresan destekli tek hücreli sıralama yoluyla insan pul pul dökülmüş yaprak döken dişlerden (SHED'ler) kök hücreleri tanımlamanın ve saflaştırmanın bir yolunu ana hatlarıyla belirtir. CD90-floresein izotiyosiyanat (FITC), CD73-peridinin-klorofil proteini (PerCP-Cy5.5), CD105-allofikosiyanin (APC) ve CD44-V450 gibi yüzey belirteçlerinin eşzamanlı ekspresyonu, multiparametrik akış sitometrisi kullanarak MSC'lerin "parlak", pozitif ekspresörlerini tanımladı. Bununla birlikte, bu pozitif belirteçlerin dörtlü ekspresyonörlerinin yüzdelerinde 7. pasajdan sonraki pasajlara kadar önemli bir düşüş gözlendi.

İmmünfenotipli alt popülasyonlar, sadece iki pozitif ve bir negatif markörün dahil etme kriterlerini oluşturduğu tek hücreli sıralama modu kullanılarak sıralandı. Bu metodoloji, tasnif edilen popülasyonların hücre canlılığını sağladı ve tasnif sonrası hücre proliferasyonunu sürdürdü. Bu tür bir sıralama için aşağı akış uygulaması, kapılı alt popülasyonlar için soya özgü farklılaşmayı değerlendirmek için kullanılabilir. Bu yaklaşım, izolasyon koşullarını iyileştirmek ve çoklu hücre yüzeyi işaretleyici bilgisi elde etmek için diğer tek hücreli sistemlere uygulanabilir.