मानव कंकाल की मांसपेशी की फाइबर प्रकार की पहचान

यहां वर्णित तकनीक का उपयोग डॉट ब्लॉटिंग का उपयोग करके व्यक्तिगत मांसपेशी फाइबर के खंडों में विशिष्ट मायोसिन हेवी चेन (एमएचसी) आइसोफॉर्म की पहचान करने के लिए किया जा सकता है, जिसे बाद में मांसपेशी फाइबर प्रकार (MyDoBID) के आईडीएनटिफिकेशन के लिए DoT Bलोटिंग द्वारा माईओसिन हेवी चेन डिटेक्शन के रूप में संदर्भित किया जाता है। यह प्रोटोकॉल मानव कंकाल की मांसपेशियों को फ्रीज-सुखाने और एकल मांसपेशी फाइबर के खंडों को अलग करने की प्रक्रिया का वर्णन करता है। MyDoBID का उपयोग करते हुए, टाइप I और II फाइबर को क्रमशः एमएचसीआई- और आईआईए-विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ वर्गीकृत किया जाता है। वर्गीकृत फाइबर को तब प्रत्येक बायोप्सी के लिए फाइबर प्रकार-विशिष्ट नमूनों में जोड़ा जाता है।

प्रत्येक नमूने में कुल प्रोटीन सोडियम डोडेसिल-सल्फेट पॉलीक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस-पेज) और यूवी-सक्रिय जेल तकनीक द्वारा निर्धारित किया जाता है। पश्चिमी सोख्ता का उपयोग करके फाइबर प्रकार के नमूने मान्य हैं। कई पश्चिमी धब्बों में लक्ष्य प्रोटीन का पता लगाने को बढ़ाने के लिए प्रोटीन लोडिंग सामान्यीकरण करने का महत्व भी वर्णित है। एकल-फाइबर पश्चिमी धब्बों की तुलना में फाइबर प्रकार-विशिष्ट नमूनों में वर्गीकृत फाइबर को समेकित करने के लाभों में नमूना बहुमुखी प्रतिभा, नमूना थ्रूपुट में वृद्धि, कम समय का निवेश और लागत-बचत उपाय शामिल हैं, जबकि मूल्यवान फाइबर प्रकार-विशिष्ट जानकारी को बनाए रखा जाता है जिसे अक्सर होमोजिनाइज्ड मांसपेशी नमूनों का उपयोग करके अनदेखा किया जाता है। प्रोटोकॉल का उद्देश्य फ्रीज-सूखे मानव कंकाल की मांसपेशियों के नमूनों से अलग टाइप 1 और टाइप 2 फाइबर की सटीक और कुशल पहचान प्राप्त करना है।

इन व्यक्तिगत तंतुओं को बाद में टाइप 1 और टाइप 2 फाइबर प्रकार-विशिष्ट नमूने बनाने के लिए जोड़ा जाता है। इसके अलावा, प्रोटोकॉल को टाइप आईआईएक्स फाइबर की पहचान को शामिल करने के लिए विस्तारित किया गया है, जिसमें एक्टिन का उपयोग उन तंतुओं के लिए मार्कर के रूप में किया जाता है जो एमएचसीआई और एमएचसीआईआईए के लिए नकारात्मक थे, जिन्हें पश्चिमी सोख्ता द्वारा आईआईएक्स फाइबर के रूप में पुष्टि की जाती है। प्रत्येक फाइबर प्रकार-विशिष्ट नमूना तब पश्चिमी सोख्ता तकनीकों का उपयोग करके विभिन्न लक्ष्य प्रोटीन की अभिव्यक्ति को निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है।