Brug af Drosophila larve neuromuskulær junction og muskelceller til at visualisere mikrotubulus netværk

Mikrotubulusnetværket er en væsentlig bestanddel af nervesystemet. Mutationer i mange mikrotubuli regulatoriske proteiner er forbundet med neurodevelopmental lidelser og neurologiske sygdomme, såsom mikrotubulus-associeret protein Tau til neurodegenerative sygdomme, mikrotubulus skæreprotein Spastin og Katanin 60 forårsager henholdsvis arvelige spastiske paraplegi og neurodevelopmental abnormiteter. Påvisning af mikrotubulusnetværk i neuroner er fordelagtigt til belysning af patogenesen af neurologiske lidelser. Imidlertid gør den lille størrelse af neuroner og det tætte arrangement af aksonale mikrotubulusbundter visualisering af mikrotubulusnetværkene udfordrende. I dette studie beskriver vi en metode til dissektion af larvens neuromuskulære kryds og muskelceller samt immunfarvning af α-tubulin og mikrotubulusassocieret protein Futsch for at visualisere mikrotubulusnetværk i Drosophila melanogaster. Det neuromuskulære kryds tillader os at observere både præ- og postsynaptiske mikrotubuli, og den store størrelse af muskelceller i Drosophila-larven muliggør klar visualisering af mikrotubulusnetværket. Her, ved at mutere og overudtrykke Katanin 60 i Drosophila melanogaster og derefter undersøge mikrotubulusnetværkene i det neuromuskulære kryds og muskelceller, afslører vi nøjagtigt Katanin 60's regulerende rolle i neuroudvikling. Derfor, kombineret med de kraftfulde genetiske værktøjer af Drosophila melanogaster, letter denne protokol i høj grad genetisk screening og mikrotubulusdynamikanalyse for rollen som mikrotubulusnetværksregulerende proteiner i nervesystemet.