Bruke Drosophila larver nevromuskulære veikryss og muskelceller for å visualisere mikrotubuli nettverk

Mikrotubulinettverket er en viktig komponent i nervesystemet. Mutasjoner i mange mikrotubuli regulatoriske proteiner er assosiert med nevrodevelopmental lidelser og nevrologiske sykdommer, slik som mikrotubuli-assosiert protein Tau til neurodegenerative sykdommer, mikrotubuli kutte protein Spastin og Katanin 60 forårsake arvelig spastisk paraplegi og nevrodevelopmental abnormiteter, henholdsvis. Deteksjon av mikrotubulære nettverk i nevroner er fordelaktig for å belyse patogenesen av nevrologiske lidelser. Den lille størrelsen på nevroner og det tette arrangementet av aksonale mikrotubulibunter gjør imidlertid visualisering av mikrotubuli-nettverkene utfordrende. I denne studien beskriver vi en metode for disseksjon av larvens nevromuskulære overgang og muskelceller, samt immunfarging av α-tubulin og mikrotubuli-assosiert protein Futsch for å visualisere mikrotubulinettverk i Drosophila melanogaster. Det nevromuskulære veikrysset tillater oss å observere både pre- og postsynaptiske mikrotubuli, og den store størrelsen på muskelceller i Drosophila-larven muliggjør klar visualisering av mikrotubulinettverket. Her, ved å mutere og overuttrykke Katanin 60 i Drosophila melanogaster, og deretter undersøke mikrotubuli-nettverkene i det nevromuskulære veikrysset og muskelcellene, avslører vi nøyaktig den regulatoriske rollen til Katanin 60 i nevroutvikling. Derfor, kombinert med de kraftige genetiske verktøyene til Drosophila melanogaster, letter denne protokollen i stor grad genetisk screening og mikrotubuli dynamikkanalyse for rollen som mikrotubuli nettverksregulerende proteiner i nervesystemet.