Användning av Drosophila Larval Neuromuscular Junction och muskelceller för att visualisera mikrotubulinätverk

Mikrotubulinätverket är en viktig komponent i nervsystemet. Mutationer i många mikrotubuliregulatoriska proteiner är associerade med utvecklingsneurologiska funktionsnedsättningar och neurologiska sjukdomar, såsom mikrotubuli-associerat protein Tau till neurodegenerativa sjukdomar, mikrotubuliavskiljande protein Spastin och Katanin 60 orsakar ärftlig spastisk paraplegi respektive utvecklingsneurologiska avvikelser. Detektion av mikrotubulinätverk i nervceller är fördelaktigt för att belysa patogenesen av neurologiska sjukdomar. Den lilla storleken på neuroner och det täta arrangemanget av axonala mikrotubulibuntar gör det dock utmanande att visualisera mikrotubulinätverken. I denna studie beskriver vi en metod för dissektion av larvneuromuskulära förbindelser och muskelceller, samt immunfärgning av α-tubulin och mikrotubuli-associerat protein Futsch för att visualisera mikrotubulinätverk i Drosophila melanogaster. Den neuromuskulära förbindelsen gör det möjligt för oss att observera både pre- och postsynaptiska mikrotubuli, och den stora storleken på muskelcellerna i Drosophila-larven möjliggör tydlig visualisering av mikrotubulinätverket. Här, genom att mutera och överuttrycka Katanin 60 i Drosophila melanogaster, och sedan undersöka mikrotubulinätverken i den neuromuskulära förbindelsen och muskelcellerna, avslöjar vi exakt den reglerande rollen för Katanin 60 i neuroutveckling. Därför, i kombination med de kraftfulla genetiska verktygen hos Drosophila melanogaster, underlättar detta protokoll i hög grad genetisk screening och analys av mikrotubulidynamik för rollen som mikrotubulinätverkets reglerande proteiner i nervsystemet.