Drosophila-larvale neuromusculaire junctie en spiercellen gebruiken om het netwerk van microtubuli te visualiseren

Het netwerk van microtubuli is een essentieel onderdeel van het zenuwstelsel. Mutaties in veel regulerende eiwitten van microtubuli worden geassocieerd met neurologische ontwikkelingsstoornissen en neurologische aandoeningen, zoals microtubuli-geassocieerd eiwit Tau tot neurodegeneratieve ziekten, microtubuli-afsnijdend eiwit Spastin en Katanin 60 veroorzaken respectievelijk erfelijke spastische dwarslaesie en neurologische ontwikkelingsafwijkingen. Detectie van microtubuli-netwerken in neuronen is voordelig voor het ophelderen van de pathogenese van neurologische aandoeningen. De kleine omvang van neuronen en de dichte rangschikking van axonale microtubulibundels maken het visualiseren van de microtubuli-netwerken echter een uitdaging. In deze studie beschrijven we een methode voor dissectie van de larvale neuromusculaire junctie en spiercellen, evenals immunokleuring van α-tubuline en microtubuli-geassocieerd eiwit Futsch om microtubuli-netwerken in Drosophila melanogaster te visualiseren. De neuromusculaire junctie stelt ons in staat om zowel pre- als postsynaptische microtubuli te observeren, en de grote omvang van spiercellen in Drosophila-larven zorgt voor een duidelijke visualisatie van het microtubuli-netwerk. Hier, door Katanin 60 te muteren en tot overexpressie te brengen in Drosophila melanogaster, en vervolgens de microtubuli-netwerken in de neuromusculaire junctie en spiercellen te onderzoeken, onthullen we nauwkeurig de regulerende rol van Katanin 60 in de neurologische ontwikkeling. Daarom, in combinatie met de krachtige genetische hulpmiddelen van Drosophila melanogaster, vergemakkelijkt dit protocol de genetische screening en de analyse van de dynamiek van microtubuli aanzienlijk voor de rol van regulerende eiwitten van het microtubuli-netwerk in het zenuwstelsel.