Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Здесь мы представляем протокол получения энтомопатогенных грибов от лесного древоточца и заместительный способ оценки их энтомопатогенной активности с помощью модельного насекомого Coleopteran. Этот метод эффективен и удобен для изучения энтомопатогенных грибных ресурсов от насекомых-вредителей древоточения в естественных лесах.

Abstract

Лесные древоточцы (FWB) наносят серьезный ущерб древесине и наносят экономический ущерб во всем мире. Выделение энтомопатогенных грибов (ЭПФ) в период появления ДСБ считается приемлемой альтернативой химическому контролю. Тем не менее, ресурсы EPF были значительно менее изучены для FWB, в отличие от сельскохозяйственных насекомых-вредителей. В данной статье представлен протокол исследования ресурсов EPF из FWB на примере диких популяций Monochamus alternatus . В этом протоколе назначаются ловушки с приманкой с М. Аттрактанты Alternatus для различных популяций гарантировали сбор адекватных образцов с естественными симптомами инфекции в периоды появления жука. После тонкого препарирования покровов и помещения их в селективную среду виды грибов были выделены из каждой части тел жуков и идентифицированы на основе как молекулярных, так и морфологических признаков.

Несколько видов грибов были сертифицированы как паразитические EPF путем повторного заражения здоровых M. alternatus споровыми суспензиями. Их поведенческие фенотипы на M. alternatus наблюдали с помощью сканирующей электронной микроскопии и в дальнейшем сравнивали с таковыми на модельном насекомом Tribolium castaneum. Для EPF, которые демонстрируют устойчивые фенотипы паразитизма на обоих видах жуков, оценка их активности на T. Castaneum предоставил ценную информацию о летальности для будущих исследований M. alternatus. Этот протокол помог обнаружить недавно зарегистрированный EPF в популяциях M. alternatus в Китае, который может быть применен в качестве эффективного подхода для изучения большего количества ресурсов EPF из других FWB.

Introduction

Опустошение, вызванное насекомыми-вредителями, привело к большим экологическим и экономическим потерям как в лесных, так и в сельскохозяйственных экосистемах. Большинство сельскохозяйственных вредителей подвергают себя воздействию естественных врагов или искусственных агентов контроля, повреждая растения-хозяева. Вместо этого лесные древоточцы (FWB) почти полностью завершают свои циклы развития внутри стволов деревьев-хозяев1, что создает большие проблемы для изучения эффективных организмов биоконтроля из FWB в дикой природе. Что еще хуже, так это то, что ДББ являются носителями большого количества фитопатогено....

Protocol

1. Выделение грибов из M. alternatus (рис. 1)

  1. Соберите образец жука
    1. Собираем сосны жуков-пилильщиков М. альтернативы с использованием коммерческих ловушек (см. Таблицу материалов) с приманкой аттрактантами д?.......

Representative Results

Выделение и идентификация грибковых изолятов из M. Альтернатус
С помощью ловушек-аттрактантов было выведено большое количество (всего около 500 жуков) М. Alternatus были собраны из пяти географических регионов. Были отобраны трупы жуков с типи?.......

Discussion

Различные географические популяции FWB могут по-разному взаимодействовать с природными энтомопатогенными грибами, что обусловлено долгосрочной адаптацией видов EPF к местным климатическим факторам и специфической генотипической популяцией насекомого-хозяина

Acknowledgements

Это исследование было поддержано Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (2021YFC2600100) и Фондом естественных наук провинции Чжэцзян (LY21C040001).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1.5 mL, 2 mL centrifuge tubesBiosharpBS-15-M
10 µL pipet tipsSangon BiotechF601216
10 µL, 20 µL, 100 µL, 200 µL, 1,000 µL pipettesRainin
1,000 µL pipet tipsSangon BiotechF630102
2 mL cryogenic vialsCorning430659
20x PBS bufferSangon BiotechB548117-0500
200 µL pipet tipsSangon BiotechF601227
2,000 bp makerTaKaRarSD0531
50 mL tubesNest602052
50% glutaraldehyde solutionSangon BiotechG916054
50x TAE bufferSangon BiotechB548101
6x loading bufferTaKaRarSD0503
AgaroseSangon BiotechA610013
Anhydrous ethanolJkchemicalLB10V37
Biochemistry Cultivation CabinetShanghaiyihengLRH-250F
ChloroformJuhua61553
Commercial beetle trapsFEIMENGDIBF-8www.yinyouji.com
Gel imagerBio-RadGelDoc XR+
GlycerolSangon BiotechA600232
High speed refrigerated centrifugeSigmaD-37520
High-Pressure Steam Sterilization PotMettler ToledoJA5003
Isopropyl alcoholGeneral-reagentG75885B
Nucleic acid dyeSangon BiotechA616696
Optical Microscope, OMLeicaDM2000
ParafilmParafilmPM996
PCR meterHeal ForceTrident960
Penicillin GMarklinGB15743
Potato dextrose agar, PDAOxoidCM0139
Potato dextrose broth, PDBSolarbioP9240
PrimersSangon Biotech/
Primers TaqTaKaRarRR902A
Rapid Fungi Genomic DNA Isolation KitSangon BiotechB518229
Scanning Electron Microscope, SEMHitachiS-3400N
StreptomycinMarklinS6153
TetracyclineMarklinT829835
Tween-80MarklinT6336
Vacuum freeze dryerYamatoDC801
Vortex ShakerHLDWH-861
β-MercaptoethanolMarklinM6230

References

  1. Hajek, A. E., Bauer, L. S. Microbial control of wood-boring insects attacking forest and shade trees. Field Manual of Techniques in Invertebrate Pathology. 10, 505-525 (2007).
  2. Linnakoski, R., Forbes, K. M.

Explore More Articles

Monochamus alternatusTribolium castaneum

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved