A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Здесь мы представляем протокол получения энтомопатогенных грибов от лесного древоточца и заместительный способ оценки их энтомопатогенной активности с помощью модельного насекомого Coleopteran. Этот метод эффективен и удобен для изучения энтомопатогенных грибных ресурсов от насекомых-вредителей древоточения в естественных лесах.
Лесные древоточцы (FWB) наносят серьезный ущерб древесине и наносят экономический ущерб во всем мире. Выделение энтомопатогенных грибов (ЭПФ) в период появления ДСБ считается приемлемой альтернативой химическому контролю. Тем не менее, ресурсы EPF были значительно менее изучены для FWB, в отличие от сельскохозяйственных насекомых-вредителей. В данной статье представлен протокол исследования ресурсов EPF из FWB на примере диких популяций Monochamus alternatus . В этом протоколе назначаются ловушки с приманкой с М. Аттрактанты Alternatus для различных популяций гарантировали сбор адекватных образцов с естественными симптомами инфекции в периоды появления жука. После тонкого препарирования покровов и помещения их в селективную среду виды грибов были выделены из каждой части тел жуков и идентифицированы на основе как молекулярных, так и морфологических признаков.
Несколько видов грибов были сертифицированы как паразитические EPF путем повторного заражения здоровых M. alternatus споровыми суспензиями. Их поведенческие фенотипы на M. alternatus наблюдали с помощью сканирующей электронной микроскопии и в дальнейшем сравнивали с таковыми на модельном насекомом Tribolium castaneum. Для EPF, которые демонстрируют устойчивые фенотипы паразитизма на обоих видах жуков, оценка их активности на T. Castaneum предоставил ценную информацию о летальности для будущих исследований M. alternatus. Этот протокол помог обнаружить недавно зарегистрированный EPF в популяциях M. alternatus в Китае, который может быть применен в качестве эффективного подхода для изучения большего количества ресурсов EPF из других FWB.
Опустошение, вызванное насекомыми-вредителями, привело к большим экологическим и экономическим потерям как в лесных, так и в сельскохозяйственных экосистемах. Большинство сельскохозяйственных вредителей подвергают себя воздействию естественных врагов или искусственных агентов контроля, повреждая растения-хозяева. Вместо этого лесные древоточцы (FWB) почти полностью завершают свои циклы развития внутри стволов деревьев-хозяев1, что создает большие проблемы для изучения эффективных организмов биоконтроля из FWB в дикой природе. Что еще хуже, так это то, что ДББ являются носителями большого количества фитопатогено....
1. Выделение грибов из M. alternatus (рис. 1)
Выделение и идентификация грибковых изолятов из M. Альтернатус
С помощью ловушек-аттрактантов было выведено большое количество (всего около 500 жуков) М. Alternatus были собраны из пяти географических регионов. Были отобраны трупы жуков с типи?.......
Различные географические популяции FWB могут по-разному взаимодействовать с природными энтомопатогенными грибами, что обусловлено долгосрочной адаптацией видов EPF к местным климатическим факторам и специфической генотипической популяцией насекомого-хозяина
Это исследование было поддержано Национальной программой ключевых исследований и разработок Китая (2021YFC2600100) и Фондом естественных наук провинции Чжэцзян (LY21C040001).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1.5 mL, 2 mL centrifuge tubes | Biosharp | BS-15-M | |
10 µL pipet tips | Sangon Biotech | F601216 | |
10 µL, 20 µL, 100 µL, 200 µL, 1,000 µL pipettes | Rainin | ||
1,000 µL pipet tips | Sangon Biotech | F630102 | |
2 mL cryogenic vials | Corning | 430659 | |
20x PBS buffer | Sangon Biotech | B548117-0500 | |
200 µL pipet tips | Sangon Biotech | F601227 | |
2,000 bp maker | TaKaRar | SD0531 | |
50 mL tubes | Nest | 602052 | |
50% glutaraldehyde solution | Sangon Biotech | G916054 | |
50x TAE buffer | Sangon Biotech | B548101 | |
6x loading buffer | TaKaRar | SD0503 | |
Agarose | Sangon Biotech | A610013 | |
Anhydrous ethanol | Jkchemical | LB10V37 | |
Biochemistry Cultivation Cabinet | Shanghaiyiheng | LRH-250F | |
Chloroform | Juhua | 61553 | |
Commercial beetle traps | FEIMENGDI | BF-8 | www.yinyouji.com |
Gel imager | Bio-Rad | GelDoc XR+ | |
Glycerol | Sangon Biotech | A600232 | |
High speed refrigerated centrifuge | Sigma | D-37520 | |
High-Pressure Steam Sterilization Pot | Mettler Toledo | JA5003 | |
Isopropyl alcohol | General-reagent | G75885B | |
Nucleic acid dye | Sangon Biotech | A616696 | |
Optical Microscope, OM | Leica | DM2000 | |
Parafilm | Parafilm | PM996 | |
PCR meter | Heal Force | Trident960 | |
Penicillin G | Marklin | GB15743 | |
Potato dextrose agar, PDA | Oxoid | CM0139 | |
Potato dextrose broth, PDB | Solarbio | P9240 | |
Primers | Sangon Biotech | / | |
Primers Taq | TaKaRar | RR902A | |
Rapid Fungi Genomic DNA Isolation Kit | Sangon Biotech | B518229 | |
Scanning Electron Microscope, SEM | Hitachi | S-3400N | |
Streptomycin | Marklin | S6153 | |
Tetracycline | Marklin | T829835 | |
Tween-80 | Marklin | T6336 | |
Vacuum freeze dryer | Yamato | DC801 | |
Vortex Shaker | HLD | WH-861 | |
β-Mercaptoethanol | Marklin | M6230 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved