Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Мы предоставляем всесторонний обзор и уточнение существующих протоколов формирования органоидов гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК), охватывающих все этапы культивирования органоидов. Эта система служит ценной моделью для идентификации потенциальных терапевтических мишеней и оценки эффективности препаратов-кандидатов.

Abstract

Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) является широко распространенной и смертельной опухолью во всем мире, и ее позднее обнаружение и отсутствие эффективных специфических терапевтических агентов требуют дальнейших исследований ее патогенеза и лечения. Органоиды, новая модель, которая очень похожа на нативную опухолевую ткань и может быть культивирована in vitro, вызвали значительный интерес в последние годы, с многочисленными сообщениями о разработке органоидных моделей для рака печени. В этом исследовании мы успешно оптимизировали процедуру и разработали протокол культивирования, который позволяет формировать органоиды ГЦК более крупного размера со стабильными условиями пассажа и культивирования. В этой статье мы подробно описали каждый этап процедуры, охватывая весь процесс диссоциации тканей ГЦК, органоидного покрытия, культивирования, пассажа, криоконсервации и реанимации, а также подробно описали меры предосторожности. Эти органоиды демонстрируют генетическое сходство с исходными тканями ГЦК и могут быть использованы для различных применений, включая идентификацию потенциальных терапевтических мишеней для опухолей и последующую разработку лекарств.

Introduction

Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК), широко распространенная и широко разнообразная опухоль1, привлекла значительное внимание в медицинском сообществе. Наличие линейной пластичности и существенной гетерогенности в ГЦК позволяет предположить, что опухолевые клетки, происходящие от разных пациентов, и даже различные поражения у одного и того же пациента могут проявлять несхожие молекулярные и фенотипические признаки, тем самым создавая огромные препятствия для продвижения инновационных терапевтических подходов 2,3,4,5 . ....

Protocol

Биопсия тканей человека была получена от соответствующего пациента в Аффилированной онкологической больнице и Институте Медицинского университета Гуанчжоу, и от пациентов было получено информированное согласие. Подробные сведения обо всех материалах, реагентах и инструментах, испо.......

Representative Results

После выполнения вышеупомянутой процедуры появление сфероидных сфероидов ГЦК обычно наблюдается в течение 3 дней (рис. 1). На рисунках 1А, Б показан установленный органоид ГЦК, который быстро развивает компактные сфероиды, характеризующиеся зак?.......

Discussion

Одним из заметных преимуществ органоидных моделей, полученных от пациентов, является их способность точно воспроизводить биологические характеристики опухолей, охватывая структуру тканей и геномный ландшафт. Эти модели демонстрируют выдающийся уровень точности и эффективно отража?.......

Acknowledgements

Исследование выполнено при поддержке Национального фонда естественных наук Китая (82122048; 82003773; 82203380) и Фонда фундаментальных и прикладных фундаментальных исследований провинции Гуандун (2023A1515011416).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
[Leu15]-gastrin I humanMerckG9145
1.5 mL MicrotubesMerckAXYMCT150LC
A8301 (TGFβ inhibitor)Tocris Bioscience2939
B27 Supplement (503), minus vitamin AThermo Fisher Scientific12587010
B-27 Supplement (503), serum-freeThermo Fisher Scientific17504044
BMP7Peprotech120-03P
Cell strainer size 100 μmMerckCLS352360
CHIR99021MerckSML1046
Collagenase DMerck11088858001
Corning Costar Ultra-LowMerckCLS3473
Costar 24-well Clear Flat Bottom Ultra-Low Attachment Multiple Well Plates, Individually Wrapped, SterileCorning3473
Costar 6-well Clear Flat Bottom Ultra-Low Attachment Multiple Well Plates, Individually Wrapped, SterileCorning3471
Cultrex Organoid Harvesting SolutionR&D SYSTEMS3700-100-01Organoid harvesting solution
Cultrex Reduced Growth Factor BME, Type 2 PathClear (BME)Merck3533-005-02
DAPTMerckD5942
DexamethasoneMerckD4902
DMSOMerckC6164
DNaseIMerckDN25
Dulbecco's Modified Eagle Medium/Ham's F-12Thermo Fisher Scientific12634028Advanced DMEM/F-12
Earle’s balanced salt solution (EBSS)Thermo Fisher Scientific24010043
ForcepsN/AN/A
ForskolinTocris Bioscience1099
GlutaMAX supplementThermo Fisher Scientific35050061
HEPES, 1 MThermo Fisher Scientific15630080
Leica DM6 B Fluorescence Motorized MicroscopeLeicaN/A
N2 supplement (1003)Thermo Fisher Scientific17502048
N-acetylcysteineMerckA0737-5MG
NicotinamideMerckN0636
Nunc 15 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge TubesThermo Fisher Scientific339651
Nunc 50 mL Conical Sterile Polypropylene Centrifuge TubesThermo Fisher Scientific339653
Penicillin/streptomycin (10,000 U/mL)Thermo Fisher Scientific15140122
Recombinant human EGFPeprotechAF-100-15
Recombinant human FGF10Peprotech100-26
Recombinant human FGF19Peprotech100-32
Recombinant human HGFPeprotech100-39
Recombinant human NogginPeprotech120-10C
Rho kinase inhibitor Y-27632 dihydrochlorideMerckY0503
R-spodin1-conditioned medium(Broutier et al.)N/ASecretion of cell lines
Surgical scissorsN/AN/A
Surgical specimen of tumor removed from HCC patientsAffiliated Cancer Hospital and Institute of Guangzhou Medical UniversityN/A
TNFαPeprotech315-01A
TrypLE Express Enzyme (1x), no phenol redThermo Fisher Scientific12604013Trypsin substitute
Wnt-3a-conditioned medium(Broutier et al.)N/ASecretion of cell lines

References

  1. Vogel, A., Meyer, T., Sapisochin, G., Salem, R., Saborowski, A. Hepatocellular carcinoma. Lancet. 400 (10360), 1345-1362 (2022).
  2. Craig, A. J., von Felden, J., Garcia-Lezana, T., Sarcognato, S., Villanueva, A. Tumour evolution in hepatocellular carcinoma.

Explore More Articles

198in vitro

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved