Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

מחקר זה מתאר שיטה מהירה ויעילה לניתוח מרכיבי התא של קרישי דם מוחיים באמצעות המסת קרישי דם, צביעת תאים ובדיקת דם שגרתית.

Abstract

פקקת מוחית, קריש דם בעורק מוחי או בווריד, הוא הסוג הנפוץ ביותר של אוטם מוחי. חקר מרכיבי התאים של קרישי דם מוחיים חשוב לאבחון, טיפול ופרוגנוזה. עם זאת, הגישות הנוכחיות לחקר מרכיבי התא של קרישי הדם מבוססות בעיקר על צביעה באתרה , שאינה מתאימה למחקר מקיף של מרכיבי התא מכיוון שהתאים עטופים היטב בקרישי הדם. מחקרים קודמים בודדו בהצלחה אנזים פיברינוליטי (sFE) מ-Sipunculus nudus, שיכול לפרק את הפיברין הצולב, באופן ישיר, ולשחרר את מרכיבי התא. מחקר זה ביסס שיטה מקיפה המבוססת על sFE לחקר מרכיבי התא של פקקת מוחית. פרוטוקול זה כולל המסת קרישי דם, שחרור תאים, צביעת תאים ובדיקת דם שגרתית. על פי שיטה זו, ניתן היה לחקור את מרכיבי התא באופן כמותי ואיכותי. התוצאות המייצגות של ניסויים בשיטה זו מוצגות.

Introduction

מחלת כלי דם במוח היא אחת משלוש מחלות עיקריות שיכולות לאיים על בריאות האדם, ביניהן מחלת כלי דם איסכמית במוח מהווה יותר מ -80%. פקקת מוחית ופקקת ורידים מוחיים הן מחלות כלי הדם האיסכמיות המודאגות ביותר כיום, הנגרמות בעיקר על ידי קרישי דם מוחיים 1,2. אם הטיפול לא נעשה כראוי, יהיו לו שיעורי נכות ותמותה גבוהים ושיעור הישנות גבוה לאחר השחרור3.

לאחרונה, מספר גדל והולך של מחקרים הראו כי מרכיבי התאים של קרישי דם מוחיים נמצאים בקורלציה הדוקה עם האבחון, הטיפול והפרוגנוזה של פקקת מוחית 4,5,6

Protocol

המחקר בוצע בהתאם להנחיות המוסדיות של ועדת האתיקה הרפואית של אוניברסיטת Huaqiao. קרישי הדם המוחיים הוסרו בניתוח ונאספו בבית החולים הראשון Quanzhou, המסונף לאוניברסיטה הרפואית פוג'יאן, בהסכמה מדעת של החולים.

1. טיפול מקדים לקריש דם

  1. מניחים את הקרישים על צלחת נקייה, מוסי?.......

Representative Results

בשלב הראשוני של תהליך ההשפלה, נמצא כי קרישי הדם היו בעלי מבנה קומפקטי אדום, ותמיסת העבודה הייתה חסרת צבע. לאחר הדגירה במשך 30 דקות, תמיסת העבודה הפכה לאדומה בהירה, מה שמצביע על כך שתאי הדם המוצלבים שוחררו לתמיסת העבודה. רוב הקרישים הומסו בעת הארכת זמן הדגירה ל-5 שעות, ותמיסת העבודה הפכה לאדומה.......

Discussion

sFE הוא סוכן פיברינוליטי שיכול לפרק את הפיברין באופן ישיר ויעיל12,16. כאן, נעשה שימוש ב-sFE כדי לפרק את הפיברין הצולב-מקושר של קרישי הדם במוח, לשחרר את התאים הסגורים בתוך קרישי הדם, ולנתח את מרכיבי התאים של הקרישים באופן איכותי וכמותי. נתוני המיקרוסקופ ובדיקת הדם ?.......

Acknowledgements

מחקר זה מומן על ידי לשכת המדע והטכנולוגיה של העיר שיאמן (3502Z20227197), ולשכת המדע והטכנולוגיה של מחוז פוג'יאן (מס '2019J01070, מס '2021Y0027).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Agglutination Reaction PlateROTESTRTB-4003
Auto Hematology AnalyzerSYSMEXXNB2
Automatic Vertical Pressure Steam Sterilizer SANYOMLS-3750
Centrifuge Tube (1.5 mL)BiosharpBS-15-M
Clean benchAIRTECHBLB-1600
Constant Temperature IncubatorJINGHONGJHS-400
Culture Dish (100 mm)NEST704001
DHG Series Heating and Drying Oven SENXINDGG-9140AD
Electronic Analytical BalanceDENVERTP-213
Filter Membrane (0.22 µm)Millex GPSLGP033NK
Micro Refrigerated Centrifuge CenceH1650-W
Microscope SlidesCITOGLAS01-30253-50
Milli-Q ReferenceMilliporeZ00QSV0CN
Normal SalineCISENH37022337
Optical MicroscopeNikonECLIPSE E100
ParafilmBemisPM-996
Phosphate-Buffered SalineBeyotimeC0221A
Pipette Tip (1 mL )AxygeneT-1000XT-C
Pipette Tip (200 µL)AxygeneT-200XT-C
Pipettor (1 mL)Thermo Fisher ScientificZY18723
Pipettor (200 µL)Thermo Fisher ScientificZY20280
ScalpelMARTOR23111
Small-sized Vortex OscillatorKylin-BellVORTEX KB3
TweezerHysticHKQS-180
Wright Staining SolutionBeyotimeC0135-500ml

References

  1. Park, D. W., et al. Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial. Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).
  2. Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T.

Explore More Articles

Sipunculus nudus

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved