פציעת הקפאה בשריר המסה של עכבר להקמת מודל פיברוזיס שריר הלסת

Summary

מטרת פרוטוקול זה היא לבסס מודל פיברוזיס שרירי הפנים. השוואת ההיסטולוגיה בין מעסה עכברים לשריר הקדמי טיביאליס לאחר פציעה קפואה אישרה פיברוזיס שריר המעסה. מודל זה יאפשר חקירה נוספת של המנגנון העומד בבסיס פיברוזיס שריר הפנים.

Abstract

שריר הלסת מהווה תת-קבוצה של רקמת שריר השלד, עם מסלול אבולוציוני מובהק ומקור התפתחותי. בניגוד לשרירי הגפיים שמקורם בסומיט, שרירי הלסת מקורם בקשתות הענפיות, עם תרומות בלעדיות מהפסגה העצבית הגולגולתית. מחקר שנערך לאחרונה גילה כי התחדשות שונה גם בקבוצת שרירי הפנים. עם זאת, מנגנון הרגולציה הבסיסי עדיין לא נחשף. המודלים הנוכחיים להתחדשות שרירי השלד מתמקדים בעיקר בשרירי הגפיים והגו. בפרוטוקול זה, קרח יבש שימש לגרימת פציעת הקפאה בשריר המסה של העכבר ובשריר הטיביאליס הקדמי ליצירת מודל פיברוזיס של שריר הפנים. הדינמיקה הטמפורלית של תאי לוויין שריר ואבות פיברו-אדיפוגניים הייתה שונה בין שני השרירים, מה שהוביל לפגיעה בהתחדשות מיופייבר ולשקיעת מטריצה חוץ-תאית מוגזמת. בעזרת מודל זה, מחקר מעמיק יותר של התחדשות שרירים באזור orofacial יכול להתבצע כדי לפתח גישות טיפוליות עבור חולים עם מחלות orofacial .

Introduction

שרירי הלסת הם קריטיים בפעילויות פיזיולוגיות יומיומיות כגון מסטיקציה, דיבור, נשימה והבעות פנים¹. עם זאת, בעיוותים אורופציאליים מולדים, שרירים אלה מפגינים שינויים אטרופיים ופיברוטיים, מה שמוביל לפגיעה בבריאות הגוף ובקוגניציה חברתית². ניתוח שחזור פנים נותר טיפול הקו הראשון, אך עד 30-70% מהמטופלים לאחר הניתוח עדיין סובלים מאובדן שרירים ותפקוד לקוי של שרירים ^3,4 כישלון התחדשות שריר הלסת מיוחס לגורמים פנימיים, שאינם ניתנים לתיקון על ידי ניתוח בלבד.

הופעתם של שרירי הלסת היא חידוש אבולוציוני, המלווה את ראש החוליות המורכב והלב הקאמרי

Protocol

כל ההליכים בבעלי חיים במחקר זה נבדקו ואושרו על ידי הוועדה האתית של בית הספר לסטומטולוגיה במערב סין, אוניברסיטת סצ'ואן (WCHSIRB-D-2020-114). עכברי C57BL/6 זכרים (בני 5 שבועות) גודלו במתקן מבוקר לחות (53 ± 2%) ובטמפרטורה מבוקרת (23 ± 2 מעלות צלזיוס) והיו במחזור אור/חושך של 12 שעות. ראה טבלת חומרים לפרטים .......

Discussion

ישנם מגוון מודלים של פציעות לחקר התחדשות שרירי השלד, כולל שימוש בגירויים פיזיים, כימיים וכירורגיים 10,11,12,13,14,15,16. קרדיוטוקסין ובריום כלוריד הם שני הכימיקלים הנפו?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mL syringe	Shifeng Medical Apparatus and Instrument (Chengdu, Sichuan, China)	1-ml syringe	/
Acetone	Chron Chemicals	Aceton	/
Adhesion microscope slides	Citotest Scientific	188105	/
Animal depilatory	Phygene Scientific	PH1877	/
BSA (bovine serum albumin)	Solarbio Life Sciences	A8010	/
DAPI	Solarbio Life Sciences	C0065	/
Donkey anti-goat Alexa Fluor 488	Abcam	ab150129	1:200
donkey serum	Solarbio Life Sciences	SL050	/
Dry Ice	Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)	rice-shaped dry ice	/
IFKine Red Donkey anti-rabbit	Abbkine Scientific Company	A24421	1:200
Insulation barrels (big)	Thermos	D600	/
Insulation barrels (small)	Polar Ware	250B	/
Isoflurane	RWD Life Technology Company (Shenzhen, Guangdong, China)	R510-22	/
Isopentane	MACKLIN	M813375	/
Laminin	Sigma-Aldrich	L9393	1:1000
Liquid nitrogen	Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)	/	/
M.O.M kit	Vector Laboratories	BMK-2202
Mice	Dashuo Biological Technology Company(Chengdu, Sichuan, China)	5 weeks old	/
mounting medium	Solarbio Life Sciences	S2100	/
Nertral balsam	Solarbio Life Sciences	G8590	/
Pax7	Developmental Studies Hybridoma Bank	Pax7	1:5
Pdgfra	R&D systems	AF1062	1:40
Sirus Red Staining Kit	Solarbio Life Sciences	G1472	/
Surgical instruments (forceps, scissors, needle holder, scalpel, and suture)	Zhuoyue Medical Instrument (Suqian, Jiangsu, China)	/	/
Tissue-tek OCT	Sakura	4583	/
Triton	Shanghai Scigrace Biotech	ABIO-Biofroxx-0006A	/
Zoletil	Virbac	Zoletil 50	/