A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Замораживание травмы жевательной мышцы мыши для создания модели фиброза орофациальных мышц
In This Article
Summary
Целью этого протокола является установление модели фиброза орофациальных мышц. Сравнение гистологии между жевательной мышцей мышей и передней большеберцовой мышцей после травмы обморожения подтвердило фиброз жевательной мышцы. Эта модель облегчит дальнейшее изучение механизма, лежащего в основе фиброза орофациальных мышц.
Abstract
Орофациальная мышца представляет собой подмножество скелетной мышечной ткани с четкой эволюционной траекторией и происхождением развития. В отличие от мышц конечностей, полученных из сомита, орофациальные мышцы берут начало от жаберных дуг, с исключительным вкладом черепного нервного гребня. Недавнее исследование показало, что регенерация также отличается в группе орофациальных мышц. Тем не менее, лежащий в основе механизм регулирования еще предстоит раскрыть. Современные модели регенерации скелетных мышц в основном сосредоточены на мышцах конечностей и туловища. В этом протоколе сухой лед использовался для индуцирования травмы замерзания жевательной мышцы мыши и передней большеберцовой мышцы для создания модели фиброза орофациальной мышцы. Временная динамика мышечных сателлитных клеток и фиброадипогенных предшественников различалась между двумя мышцами, что приводило к нарушению регенерации миоволокон и чрезмерному отложению внеклеточного матрикса. С помощью этой модели можно провести более глубокое исследование регенерации мышц в орофациальной области для разработки терапевтических подходов к пациентам с орофациальными заболеваниями.
Introduction
Орофациальные мышцы имеют решающее значение в повседневной физиологической деятельности, такой как жевание, речь, дыхание и мимика1. Однако при врожденных орофациальных деформациях эти мышцы демонстрируют атрофические и фиброзные изменения, что приводит к нарушению здоровья тела и социального познания2. Реконструктивная хирургия лица остается лечением первой линии, но до 30-70% послеоперационных пациентов по-прежнему страдают от потери мышечной массы и мышечной дисфункции 3,4 Неудача регенерации орофациальных мышц объясняется внутренними факторами, которые не мог....
Protocol
Все процедуры на животных в этом исследовании были рассмотрены и одобрены Этическим комитетом Западно-Китайской школы стоматологии Сычуаньского университета (WCHSIRB-D-2020-114). Самцы мышей C57BL/6 (в возрасте 5 недель) выращивались в помещении с контролируемой влажностью (53 ± 2%) и температурой (23.......
Representative Results
Окрашивание HE и Sirius Red (рис. 4 и дополнительный рисунок S1) выявили полную мышечную регенерацию ТА в этой модели травмы замерзания. Напротив, у MAS наблюдалось нарушение регенерации миоволокон и чрезмерное отложение внеклеточного матрикса. Гистология инт?.......
Discussion
Существует множество моделей травм для изучения регенерации скелетных мышц, включая использование физических, химических и хирургических стимулов 10,11,12,13,14,15,16.
Acknowledgements
Это исследование было поддержано грантами Комитета по здравоохранению и благополучию провинции Сычуань (номер гранта: 21PJ063) и Национального фонда естественных наук Китая (номер гранта: 82001031).
....Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1 mL syringe | Shifeng Medical Apparatus and Instrument (Chengdu, Sichuan, China) | 1-ml syringe | / |
| Acetone | Chron Chemicals | Aceton | / |
| Adhesion microscope slides | Citotest Scientific | 188105 | / |
| Animal depilatory | Phygene Scientific | PH1877 | / |
| BSA (bovine serum albumin) | Solarbio Life Sciences | A8010 | / |
| DAPI | Solarbio Life Sciences | C0065 | / |
| Donkey anti-goat Alexa Fluor 488 | Abcam | ab150129 | 1:200 |
| donkey serum | Solarbio Life Sciences | SL050 | / |
| Dry Ice | Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China) | rice-shaped dry ice | / |
| IFKine Red Donkey anti-rabbit | Abbkine Scientific Company | A24421 | 1:200 |
| Insulation barrels (big) | Thermos | D600 | / |
| Insulation barrels (small) | Polar Ware | 250B | / |
| Isoflurane | RWD Life Technology Company (Shenzhen, Guangdong, China) | R510-22 | / |
| Isopentane | MACKLIN | M813375 | / |
| Laminin | Sigma-Aldrich | L9393 | 1:1000 |
| Liquid nitrogen | Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China) | / | / |
| M.O.M kit | Vector Laboratories | BMK-2202 | |
| Mice | Dashuo Biological Technology Company(Chengdu, Sichuan, China) | 5 weeks old | / |
| mounting medium | Solarbio Life Sciences | S2100 | / |
| Nertral balsam | Solarbio Life Sciences | G8590 | / |
| Pax7 | Developmental Studies Hybridoma Bank | Pax7 | 1:5 |
| Pdgfra | R&D systems | AF1062 | 1:40 |
| Sirus Red Staining Kit | Solarbio Life Sciences | G1472 | / |
| Surgical instruments (forceps, scissors, needle holder, scalpel, and suture) | Zhuoyue Medical Instrument (Suqian, Jiangsu, China) | / | / |
| Tissue-tek OCT | Sakura | 4583 | / |
| Triton | Shanghai Scigrace Biotech | ABIO-Biofroxx-0006A | / |
| Zoletil | Virbac | Zoletil 50 | / |
References
- Yoshioka, K., Kitajima, Y., Seko, D., Tsuchiya, Y., Ono, Y. The body region specificity in murine models of muscle regeneration and atrophy. Acta Physiologica. 231 (1), e13553 (2021).
- Worley, M. L., Patel, K. G., Kilpatrick, L. A. Cleft lip and palate.....
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved