Замораживание травмы жевательной мышцы мыши для создания модели фиброза орофациальных мышц

Summary

Целью этого протокола является установление модели фиброза орофациальных мышц. Сравнение гистологии между жевательной мышцей мышей и передней большеберцовой мышцей после травмы обморожения подтвердило фиброз жевательной мышцы. Эта модель облегчит дальнейшее изучение механизма, лежащего в основе фиброза орофациальных мышц.

Abstract

Орофациальная мышца представляет собой подмножество скелетной мышечной ткани с четкой эволюционной траекторией и происхождением развития. В отличие от мышц конечностей, полученных из сомита, орофациальные мышцы берут начало от жаберных дуг, с исключительным вкладом черепного нервного гребня. Недавнее исследование показало, что регенерация также отличается в группе орофациальных мышц. Тем не менее, лежащий в основе механизм регулирования еще предстоит раскрыть. Современные модели регенерации скелетных мышц в основном сосредоточены на мышцах конечностей и туловища. В этом протоколе сухой лед использовался для индуцирования травмы замерзания жевательной мышцы мыши и передней большеберцовой мышцы для создания модели фиброза орофациальной мышцы. Временная динамика мышечных сателлитных клеток и фиброадипогенных предшественников различалась между двумя мышцами, что приводило к нарушению регенерации миоволокон и чрезмерному отложению внеклеточного матрикса. С помощью этой модели можно провести более глубокое исследование регенерации мышц в орофациальной области для разработки терапевтических подходов к пациентам с орофациальными заболеваниями.

Introduction

Орофациальные мышцы имеют решающее значение в повседневной физиологической деятельности, такой как жевание, речь, дыхание и мимика¹. Однако при врожденных орофациальных деформациях эти мышцы демонстрируют атрофические и фиброзные изменения, что приводит к нарушению здоровья тела и социального познания². Реконструктивная хирургия лица остается лечением первой линии, но до 30-70% послеоперационных пациентов по-прежнему страдают от потери мышечной массы и мышечной дисфункции ^3,4 Неудача регенерации орофациальных мышц объясняется внутренними факторами, которые не мог....

Protocol

Все процедуры на животных в этом исследовании были рассмотрены и одобрены Этическим комитетом Западно-Китайской школы стоматологии Сычуаньского университета (WCHSIRB-D-2020-114). Самцы мышей C57BL/6 (в возрасте 5 недель) выращивались в помещении с контролируемой влажностью (53 ± 2%) и температурой (23.......

Discussion

Существует множество моделей травм для изучения регенерации скелетных мышц, включая использование физических, химических и хирургических стимулов 10,11,12,13,14,15,16.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1 mL syringe	Shifeng Medical Apparatus and Instrument (Chengdu, Sichuan, China)	1-ml syringe	/
Acetone	Chron Chemicals	Aceton	/
Adhesion microscope slides	Citotest Scientific	188105	/
Animal depilatory	Phygene Scientific	PH1877	/
BSA (bovine serum albumin)	Solarbio Life Sciences	A8010	/
DAPI	Solarbio Life Sciences	C0065	/
Donkey anti-goat Alexa Fluor 488	Abcam	ab150129	1:200
donkey serum	Solarbio Life Sciences	SL050	/
Dry Ice	Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)	rice-shaped dry ice	/
IFKine Red Donkey anti-rabbit	Abbkine Scientific Company	A24421	1:200
Insulation barrels (big)	Thermos	D600	/
Insulation barrels (small)	Polar Ware	250B	/
Isoflurane	RWD Life Technology Company (Shenzhen, Guangdong, China)	R510-22	/
Isopentane	MACKLIN	M813375	/
Laminin	Sigma-Aldrich	L9393	1:1000
Liquid nitrogen	Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)	/	/
M.O.M kit	Vector Laboratories	BMK-2202
Mice	Dashuo Biological Technology Company(Chengdu, Sichuan, China)	5 weeks old	/
mounting medium	Solarbio Life Sciences	S2100	/
Nertral balsam	Solarbio Life Sciences	G8590	/
Pax7	Developmental Studies Hybridoma Bank	Pax7	1:5
Pdgfra	R&D systems	AF1062	1:40
Sirus Red Staining Kit	Solarbio Life Sciences	G1472	/
Surgical instruments (forceps, scissors, needle holder, scalpel, and suture)	Zhuoyue Medical Instrument (Suqian, Jiangsu, China)	/	/
Tissue-tek OCT	Sakura	4583	/
Triton	Shanghai Scigrace Biotech	ABIO-Biofroxx-0006A	/
Zoletil	Virbac	Zoletil 50	/