Комбинация механически изолированной стромальной васкулярной фракции и фибринового гидрогеля: протокол процессинга

Summary

Механически изолированная стромальная васкулярная фракция (SVF) в сочетании с фибриновым гидрогелем является простым и эффективным носителем жизнеспособных стромальных клеток, полученных из жировой ткани, по различным показаниям, включая тканевую инженерию и/или цели заживления ран. Здесь мы представляем получение механической конструкции SVF (mSVF)-фибринового гидрогеля для трансляционных исследований и клинического применения.

Abstract

Регенеративный потенциал стромальных клеток (ASC), полученных из жировой ткани (ASC), привлек значительное внимание в регенеративных и трансляционных исследованиях. В прошлом экстракция этих клеток из жировой ткани требовала многоступенчатого ферментативного процесса, в результате чего получалась гетерогенная клеточная смесь, состоящая из ACS и других клеток, которые совместно называются стромально-васкулярной фракцией (SVF). Недавно представленные протоколы механической изоляции SVF (mSVF) требуют меньше времени и обходят нормативные требования. Недавно мы предложили протокол, который генерирует mSVF, богатую стромальными клетками, на основе комбинации эмульсификации и центрифугирования. Одной из актуальных проблем в применении mSVF для лечения ран является отсутствие каркаса, обеспечивающего защиту от механических манипуляций и высыхания. В прошлом было показано, что гидрогели фибрина являются полезным дополнением к переносу клеток для заживления ран. В данной работе мы описываем этапы подготовки гидрогелевой конструкции mSVF-фибрина в качестве нового подхода к трансляционным исследованиям и клиническому применению.

Introduction

За последние несколько лет регенеративная пластическая хирургия стала дополнительным столпом пластической хирургии¹. Регенеративная пластическая хирургия направлена на восстановление поврежденных тканей путем переноса растворимых факторов, клеток и тканей, собранных у пациента, для содействия восстановлению тканей минимально инвазивным^{способом.} Стволовые клетки (ASC), полученные из жировой ткани, привлекли внимание благодаря своей способности дифференцироваться в несколько мезенхимальных линий, что делает их многообещающим кандидатом для исследований в области реген....

Protocol

Данное исследование было выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией. Все взрослые доноры предоставили письменное информированное согласие на дальнейшее использование собранных образцов тканей. Протокол соответствует руководящим принципам комитета по эт.......

Discussion

Механическая изоляция SVF представляет собой элегантную альтернативу традиционному ферментативному подходу и обеспечивает широкий доступ к клиническому^{применению}. Фактически, mSVF, как предложено в настоящей рукописи, уже используется в клинической прак.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
12-Wellplate	Sarstedt	83.3921
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)	Biochemica	A1001.0010
50 mL-Falcon	Falcon	352070
Absorbent Towels, Two Pack	Halyard	89701
Alamar blue 25 mL	Invitrogen	DAL1025
Albumin, Bovine (BSA)	VWR	0332-500G
Biotek Cytation 5	Agilent		Cell Imaging Multimode Microplate Reader
CaCl2	Sigma-Aldrich	C5670-500G
Cryostat	Microtome
DMEM with 4,5 g/L glucose,with L-Glutamine, with sodium pyruvate	VWR	392-0416
DPBS	Gibco	14190-144
Epinephrin	Sigma-Aldrich	E4250
Fetal Bovine Serum	Biowest	S181H-500
Fibrinogen Human Plasma 100 mg	Sigma-Aldrich	341576-100MG
Formalin	Fisher Scientific	SF100-4
Formalin 4%	Formafix	1308069
FSC 22-Einbettmedium, blau	Biosystems	3801481S
Hematoxylin & Eosin Solution	Sigma-Aldrich	H3136 / HT110132
Lactated Ringer’s Solution 1000 mL	B Braun	R5410-01
Mercedes Cannula 4mm	MicroAire	PAL-R404LL
NaCl 0.9%	Bbraun	570160
OCT Embedding Matrix 125 mL	CellPath	KMA-0100-00A
Paraformaldehyde	Fisher Scientific	10342243
PBS 1%	Sigma-Aldrich	P4474
PenStrep	Sigma-Aldrich	P4333-100ML
Petridish 150mm	Sarstedt	83.1803
Phalloidin-iFluor 488 Reagent	Abcam	ab176753
Sterile Syringe 20 mL Luer	HENKE-JECT	5200-000V0
Sterile Syringe 30 mL Luer-Lock	BD	10521
Thrombin from Human Plasma	Sigma-Aldrich	T6884-100UN
Tranexamic acid	Orpha Swiss	6837093
Tulipfilter 1.2	Lencion Surgical	ATLLLL
Tulipfilter 1.4	Lencion Surgical	ATLLLL