Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Механически изолированная стромальная васкулярная фракция (SVF) в сочетании с фибриновым гидрогелем является простым и эффективным носителем жизнеспособных стромальных клеток, полученных из жировой ткани, по различным показаниям, включая тканевую инженерию и/или цели заживления ран. Здесь мы представляем получение механической конструкции SVF (mSVF)-фибринового гидрогеля для трансляционных исследований и клинического применения.

Abstract

Регенеративный потенциал стромальных клеток (ASC), полученных из жировой ткани (ASC), привлек значительное внимание в регенеративных и трансляционных исследованиях. В прошлом экстракция этих клеток из жировой ткани требовала многоступенчатого ферментативного процесса, в результате чего получалась гетерогенная клеточная смесь, состоящая из ACS и других клеток, которые совместно называются стромально-васкулярной фракцией (SVF). Недавно представленные протоколы механической изоляции SVF (mSVF) требуют меньше времени и обходят нормативные требования. Недавно мы предложили протокол, который генерирует mSVF, богатую стромальными клетками, на основе комбинации эмульсификации и центрифугирования. Одной из актуальных проблем в применении mSVF для лечения ран является отсутствие каркаса, обеспечивающего защиту от механических манипуляций и высыхания. В прошлом было показано, что гидрогели фибрина являются полезным дополнением к переносу клеток для заживления ран. В данной работе мы описываем этапы подготовки гидрогелевой конструкции mSVF-фибрина в качестве нового подхода к трансляционным исследованиям и клиническому применению.

Introduction

За последние несколько лет регенеративная пластическая хирургия стала дополнительным столпом пластической хирургии1. Регенеративная пластическая хирургия направлена на восстановление поврежденных тканей путем переноса растворимых факторов, клеток и тканей, собранных у пациента, для содействия восстановлению тканей минимально инвазивнымспособом. Стволовые клетки (ASC), полученные из жировой ткани, привлекли внимание благодаря своей способности дифференцироваться в несколько мезенхимальных линий, что делает их многообещающим кандидатом для исследований в области реген....

Protocol

Данное исследование было выполнено в соответствии с Хельсинкской декларацией. Все взрослые доноры предоставили письменное информированное согласие на дальнейшее использование собранных образцов тканей. Протокол соответствует руководящим принципам комитета по эт.......

Representative Results

Анализ на резазурин
Сначала мы изучили жизнеспособность клеток mSVF in vitro . С этой целью мы проводили анализ жизнеспособности клеток резазурина на 0, 3 и 7 день. Жизнеспособность клеток в 0, 3 и 7 дней из четырех образцов показана на рисунке 1. З.......

Discussion

Механическая изоляция SVF представляет собой элегантную альтернативу традиционному ферментативному подходу и обеспечивает широкий доступ к клиническомуприменению. Фактически, mSVF, как предложено в настоящей рукописи, уже используется в клинической прак.......

Acknowledgements

Bong-Sung Kim поддерживается Немецким научно-исследовательским обществом (KI 1973/2-1) и Фондом медико-биологических исследований Novartis (#22A046).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
12-WellplateSarstedt83.3921
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)BiochemicaA1001.0010
50 mL-FalconFalcon352070
Absorbent Towels, Two PackHalyard89701
Alamar blue 25 mLInvitrogenDAL1025
Albumin, Bovine (BSA)VWR0332-500G
Biotek Cytation 5 AgilentCell Imaging Multimode Microplate Reader 
CaCl2 Sigma-AldrichC5670-500G
CryostatMicrotome
DMEM with 4,5 g/L glucose,with L-Glutamine, with sodium pyruvateVWR392-0416
DPBSGibco14190-144
EpinephrinSigma-AldrichE4250
Fetal Bovine SerumBiowestS181H-500
Fibrinogen Human Plasma 100 mgSigma-Aldrich341576-100MG
FormalinFisher ScientificSF100-4
Formalin 4%Formafix1308069
FSC 22-Einbettmedium, blauBiosystems3801481S
Hematoxylin & Eosin SolutionSigma-AldrichH3136 / HT110132
Lactated Ringer’s Solution 1000 mLB BraunR5410-01
Mercedes Cannula 4mmMicroAirePAL-R404LL
NaCl 0.9%Bbraun570160
OCT Embedding Matrix 125 mLCellPathKMA-0100-00A
ParaformaldehydeFisher Scientific10342243
PBS 1%Sigma-AldrichP4474
PenStrepSigma-AldrichP4333-100ML
Petridish 150mmSarstedt83.1803
Phalloidin-iFluor 488 ReagentAbcamab176753
Sterile Syringe 20 mL LuerHENKE-JECT5200-000V0
Sterile Syringe 30 mL Luer-LockBD10521
Thrombin from Human PlasmaSigma-AldrichT6884-100UN
Tranexamic acidOrpha Swiss6837093
Tulipfilter 1.2Lencion SurgicalATLLLL
Tulipfilter 1.4Lencion SurgicalATLLLL

References

  1. Daar, A. S., Greenwood, H. L. A proposed definition of regenerative medicine. J Tissue Eng Regen Med. 1 (3), 179-184 (2007).
  2. Machens, H. G., Mailänder, P. Regenerative medicine and plastic surgery. Chirurg. 76 (5....

Explore More Articles

SVFMSVF

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved