एकल-कोशिका अनुक्रमण के लिए माउस कैरोटिड धमनियों से एकल-सेल निलंबन की तैयारी

कैरोटिड धमनियां गर्दन में प्रमुख रक्त वाहिकाएं होती हैं जो मस्तिष्क को रक्त और ऑक्सीजन की आपूर्ति करती हैं, लेकिन कैरोटिड स्टेनोसिस तब होता है जब कैरोटिड धमनियां पट्टिका से भरी होती हैं। एकल कोशिका स्तर पर मन्या धमनी के सेलुलर संरचना का खुलासा मन्या atherosclerosis के इलाज के लिए आवश्यक है. हालांकि, मन्या धमनियों से एकल सेल निलंबन की तैयारी के लिए कोई तैयार करने के लिए उपयोग प्रोटोकॉल नहीं है. कोशिकाओं को कम नुकसान के साथ एकल-कोशिका स्तर पर सामान्य कैरोटिड धमनियों के पृथक्करण के लिए एक उपयुक्त प्रोटोकॉल प्राप्त करने के लिए, हमने कोलेजनेज/डीएनएएस और ट्रिप्सिन की पाचन प्रक्रिया को एकीकृत करके दो-चरणीय पाचन विधि तैयार की है। एक्रिडिन ऑरेंज/प्रोपिडियम आयोडाइड (एओ/पीआई) दोहरी प्रतिदीप्ति गिनती सेल व्यवहार्यता और एकाग्रता का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया गया था, और यह पाया गया कि एकल सेल निलंबन 85% से अधिक कोशिकाओं की व्यवहार्यता और एक उच्च सेल एकाग्रता के साथ, एकल सेल अनुक्रमण के लिए आवश्यकताओं को संतुष्ट. एकल सेल डाटा प्रोसेसिंग के बाद, प्रत्येक मन्या धमनी सेल में प्रति सेल ~ 2500 टेप का एक औसत पाया गया. विशेष रूप से, सामान्य कैरोटिड धमनी के विभिन्न प्रकार के सेल प्रकार, जिनमें संवहनी चिकनी मांसपेशी कोशिकाएं (वीएसएमसी), फाइब्रोब्लास्ट्स, एंडोथेलियल कोशिकाएं (ईसी), और मैक्रोफेज और डेंड्राइटिक कोशिकाएं (एम φ / डीसी) शामिल हैं, समवर्ती रूप से पता लगाने योग्य थे। इस प्रोटोकॉल उचित संशोधनों के साथ अन्य ऊतकों से रक्त वाहिकाओं के एक एकल कोशिका निलंबन तैयार करने के लिए लागू किया जा सकता है.