Fremstilling av en enkeltcellesuspensjon fra musekaroten arterier for enkeltcellesekvensering

Carotisarterier er store blodkar i nakken som leverer blod og oksygen til hjernen, men carotisstenose oppstår når halspulsårene er tilstoppet av plakk. Å avsløre den cellulære sammensetningen av halspulsåren på enkeltcellenivå er avgjørende for behandling av aterosklerose av carotis. Imidlertid er det ingen klar til bruk protokoll for fremstilling av enkeltcellede suspensjoner fra karoten arterier. For å oppnå en egnet protokoll for dissosiasjon av normale halspulsårer på enkeltcellenivå med mindre skade på celler, designet vi en to-trinns fordøyelsesmetode ved å integrere fordøyelsesprosessen av kollagenase / DNase og trypsin. Akridin oransje / propidiumjodid (AO / PI) dual-fluorescens telling ble brukt til å oppdage cellens levedyktighet og konsentrasjon, og det ble funnet at enkeltcellesuspensjonen tilfredsstilte kravene til enkeltcellesekvensering, med levedyktigheten til celler over 85% og en høy cellekonsentrasjon. Etter encellet databehandling ble det påvist en median på ~2500 transkripsjoner per celle i hver halspulsårecelle. Spesielt var en rekke celletyper av den normale halspulsåren, inkludert vaskulære glatte muskelceller (VSMCs), fibroblaster, endotelceller (ECs) og makrofager og dendrittiske celler (Mφ / DCs), samtidig detekterbare. Denne protokollen kan anvendes for å forberede en encellesuspensjon av blodkar fra andre vev med passende modifikasjoner.