Preparación de una suspensión unicelular de arterias carótidas de ratón para la secuenciación de células individuales

Las arterias carótidas son vasos sanguíneos importantes en el cuello que suministran sangre y oxígeno al cerebro, pero la estenosis carotídea ocurre cuando las arterias carótidas están obstruidas por placa. Revelar la composición celular de la arteria carótida a nivel de una sola célula es esencial para tratar la aterosclerosis carotídea. Sin embargo, no existe un protocolo listo para usar para la preparación de suspensiones unicelulares de las arterias carótidas. Para obtener un protocolo adecuado para la disociación de las arterias carótidas normales a nivel unicelular con menos daño a las células, diseñamos un método de digestión en dos pasos mediante la integración del proceso de digestión de colagenasa/DNasa y tripsina. Se utilizó el recuento de doble fluorescencia de naranja de acridina/yoduro de propidio (AO/PI) para detectar la viabilidad y concentración celular, y se encontró que la suspensión de una sola célula cumplía con los requisitos para la secuenciación de una sola célula, con una viabilidad de células superior al 85% y una alta concentración celular. Después del procesamiento de datos de una sola célula, se detectó una mediana de ~ 2500 transcripciones por célula en cada célula de la arteria carótida. En particular, se detectaron simultáneamente una variedad de tipos de células de la arteria carótida normal, incluidas las células del músculo liso vascular (CMV), los fibroblastos, las células endoteliales (CE) y los macrófagos y las células dendríticas (Mφ/DC). Este protocolo se puede aplicar para preparar una suspensión unicelular de vasos sanguíneos de otros tejidos con las modificaciones adecuadas.