Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

החקירה הראשונית מאשרת כי דימום תת-עכבישי (SAH) גורם למוות של פריציטים במוח. הערכת התכווצות פריציטים לאחר SAH דורשת הבחנה בין פריציטים חיים ולא קיימא במוח. לפיכך, פותח הליך לסימון פריציטים במוח בני קיימא ושאינם בני קיימא בו זמנית בקטעי מוח, מה שמקל על תצפית באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי ברזולוציה גבוהה.

Abstract

פריציטים הם תאי קיר חיוניים הממוקמים בתוך מיקרוסירקולציה מוחית, חיוניים בוויסות פעיל של זרימת הדם במוח באמצעות התאמות התכווצות. באופן קונבנציונלי, ההתכווצות שלהם נמדדת על ידי התבוננות בתזוזות מורפולוגיות ושינויים בקוטר הנימים הסמוכים בנסיבות ספציפיות. עם זאת, קיבוע לאחר רקמות, הערכת חיוניות והתכווצות פריציטים כתוצאה מכך של פריציטים במוח המודמיים נפגעים. באופן דומה, תיוג גנטי של פריציטים במוח אינו מבחין בין פריציטים בני קיימא ושאינם בני קיימא, במיוחד במצבים נוירולוגיים כמו דימום תת-עכבישי (SAH), שם החקירה הראשונית שלנו מאמתת את מותו של פריציטים במוח. פרוטוקול אמין פותח כדי להתגבר על אילוצים אלה, המאפשר תיוג פלואורסצנטי בו זמנית של פריציטים במוח תפקודיים ולא פונקציונליים באזורי מוח. שיטת תיוג זו מאפשרת הדמיה של מיקרוסקופ קונפוקלי ברזולוציה גבוהה, ובו זמנית מסמנת את פרוסת המוח microvasculature. פרוטוקול חדשני זה מציע אמצעי להערכת התכווצות הפריציטים במוח, השפעתה על קוטר הנימים ומבנה הפריציטים. חקירת התכווצות פריציטים במוח בהקשר SAH מניבה הבנה מעמיקה של השפעותיה על מיקרו-סירקולציה מוחית.

Introduction

פריציטים במוח, המובחנים על ידי הבליטות הדקות שלהם וגופי התא הבולטים, מקיפים את microcirculation 1,2. בעוד שהגברת זרימת הדם במוח מונעת בעיקר על ידי התרחבות נימית, עורקים קטנים יותר מציגים קצב התרחבות איטי יותר3. התכווצות פריציטים משפיעה על קוטר הנימים ועל המורפולוגיה של הפריציטים, ומשפיעה על דינמיקת כלי הדם4. התכווצות של פריציטים במוח מובילה להתכווצות נימית, ובתרחישים פתולוגיים, התכווצות יתר עלולה לעכב את זרימת אריתרוציטים5. גורמים שונים, כולל נוראפינפרין המשתחרר מהלוקוס קורולוס, יכולים לגרום להתכווצות פריציטים במוח בתוך נימים

Protocol

פרוטוקול הניסוי אושר על ידי ועדת האתיקה והשימוש בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית של קונמינג (kmmu20220945). במחקר הנוכחי נעשה שימוש בחולדות Sprague-Dawley (SD) משני המינים, 300-350 גרם.

1. השראת מודל SAH

  1. מרדימים את החולדות באמצעות 2% איזופלורן ו-100% חמצן. לשמור על הרדמה על ידי אספקת.......

Representative Results

בתנאים פיזיולוגיים רגילים, פריציטים במוח בדרך כלל אינם עוברים מוות תאי. איור 6 ממחיש את התופעה הזו, כאשר צהוב מציין נוכחות של פריציטים חיוניים במוח; פריציטים במוח אינם מראים כתמים עם PI, מה שמצביע על יכולת הקיום שלהם. כדי להמשיך ולחקור אם פריציטים נשארים מחוברים לכלי הדם הזעי.......

Discussion

פותחו טכניקות הדמיה קונפוקלית ברזולוציה גבוהה להדמיית פריציטים חיוניים במוח, פריציטים לא חיוניים במוח והמיקרו-כלי דם בפרוסות מוח. בפרוסות מוח חריפות של חולדות, התהליך כרוך בתיוג ראשוני של פריציטים עם TO-PRO-311, ואחריו תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים עם IB412; לאחר מכן, זיהו.......

Acknowledgements

המחקר נתמך על ידי מענקים מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81960226,81760223); הקרן למדעי הטבע של מחוז יונאן (202001AS070045,202301AY070001-011)

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
6-well plateABC biochemistryABC703006RT
Adobe PhotoshopAdobeAdobe Illustrator CS6 16.0.0RT
Aluminium foilMIAOJIE225 mm x 273 mmRT
CaCl2·2H2OSigma-AldrichC3881RT
Confocal imaging softwareNikonNIS-Elements 4.10.00RT
Confocal Laser Scanning MicroscopeNikonN-SIM/C2siRT
Gas tank (5% CO2, 95% O2)PENGYIDA40LRT
Glass Bottom Confocal DishesBeyotimeFCFC020-10pcsRT
GlucoseSigma-AldrichG5767RT
GlueEVOBONDKH-502RT
Ice machineXUEKEIMS-20RT
Image analysis softwareNational Institutes of HealthImage JRT
Inhalation anesthesia systemSCIENCEQAF700RT
Isolectin B 4-FITCSIGMAL2895–2MGStore aliquots at –20 °C
KClSigma-Aldrich7447–40–7RT
KH2PO4Sigma-AldrichP0662RT
MgSO4Sigma-AldrichM7506RT
NaClSigma-Aldrich7647–14–5RT
NaH2PO4·H2OSigma-Aldrich10049–21–5RT
NaHCO3Sigma-AldrichS5761RT
Pasteur pipetteNEST Biotechnology318314RT
Peristaltic PumpScientific Industries IncModel 203RT
Propidium (Iodide)Med Chem ExpressHY-D0815/CS-7538Store aliquots at –20 °C
Stereotaxic apparatusSCIENCEQART
Syringe pumpHarvard PUMPPUMP 11 ELITE NanomiteRT
Thermostatic water bathOLABOHH-2RT
Vibrating microtomeLeicaVT1200RT

References

  1. Dalkara, T., Gursoy-Ozdemir, Y., Yemisci, M. Brain microvascular pericytes in health and disease. Acta Neuropathologica. 122 (1), 1-9 (2011).
  2. Dore-Duffy, P., Cleary, K. Morphology and properties of pericytes. Methods in Molecul....

Explore More Articles

SAH

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved