כאן, שיטה מתוארת להאכיל Drosophila melanogaster עם תרופות ותמציות צמחים ולהעריך את השפעתם על מערכת העיכול על ידי ניתוח זבובי פירות צואה פיקדונות. הזבובים שטופלו בתרופות יכולים לשמש כמודל למחקר נוסף.
כדי לחקור את הפיזיולוגיה של מערכת העיכול האנושית, מדענים ביו-רפואיים הסתמכו על שימוש באורגניזמים לדוגמה. למרות שחוקרים רבים השתמשו בעכברים כמודל לחקר תפקוד המעי, רק דיווחים מעטים התמקדו בדרוזופילה מלנוגסטר (D. melanogaster). בהשוואה לעכברים, לזבובי הפירות יתרונות רבים, כגון מחזור חיים קצר, תחזוקה חסכונית ופשוטה, וללא בעיות אתיות. יתר על כן, הפיזיולוגיה של מערכת העיכול, האנטומיה ומסלולי האיתות של יונקים שמורים מאוד ב-D. melanogaster. תמציות צמחים שימשו באופן מסורתי לטיפול בשלשולים ועצירות. לדוגמה, Psidium guajava (P. guajava) הוא אחד החומרים נוגדי השלשול הידועים ביותר באזורים הטרופיים. עם זאת, אף מחקר לא העריך את ההשפעה של תרופות נוגדות שלשול ומשלשלות ותמציות צמחים ב- D. melanogaster, ועדיין לא ידוע אם השפעות דומות (למשל, מרבצי צואה קטנים יותר, מרוכזים יותר ושופעים פחות במקרה של תרופות נוגדות שלשול) יכולות להתרחש בזבובי הפירות בהשוואה ליונקים. במחקר זה, השפעה נוגדת שלשולים הנגרמת על ידי P. guajava מודגמת בזן D. melanogaster המציג פנוטיפ שלשול. דגימת צואה המיוצרת על ידי זבובים מנוטרת באמצעות מזון בתוספת צבע. פרוטוקול זה מתאר את השיטה המשמשת להכנת מזון עם תרופות, הערכת מרבצי הצואה של זבובים הניזונים מתכשירי מזון אלה, ופירוש הנתונים המתקבלים.
מערכת העיכול (GI), המכונה גם מערכת העיכול, אחראית על העיכול והספיגה של חומרים מזינים והפרשת מוצרים לא מעוכלים1. מערכת העיכול חשופה למגוון הפרעות שעלולות לגרום לאי נוחות, כאב ושיבוש בחיי היומיום. הפרעות במערכת העיכול כוללות כאבי בטן ואי נוחות, נפיחות, צרבת, קלקול קיבה או הפרעות בעיכול, בחילות, הקאות, שלשולים ועצירות2. שלשול הוא התסמין השכיח ביותר של הפרעת GI3, והוא מוגדר כמחלה עם לפחות שלושה צואה רופפת ומימית במהלך תקופה של 24 שעות4. שלשול נגרם על ידי מגוון רחב של פתוגנים, כולל חיידקים, וירוסים, טפילים, פטריות, והוא יכול להיגרם גם על ידי תרופות 5,6. ברחבי העולם, שלשול ממשיך להיות הגורם השני לתמותה בקרב ילדים מתחת לגיל5 7. למרות שלשול יכול לפתור את עצמו, זה יכול גם להצביע על מצב בסיסי חמור יותר אם זה נמשך יותר מכמה ימים.
כדי לחקור את מערכת העיכול, חוקרים פונים למודלים של בעלי חיים כגון עכברים, חולדות וחזירים 8,9. עם זאת, השימוש בבעלי חיים אלה יכול להיות יקר וגוזל זמן מכיוון שהם דורשים מתקנים מיוחדים ושיקולים אתיים. מחקרים אחרונים הראו כי D. melanogaster יכול לשמש כמודל לחקר מערכת העיכול ולחקור כמה מנגנונים כגון שמירה על הומאוסטזיס רגנרטיבי, התפתחות הזדקנות החיסון, אובדן תפקוד מחסום אפיתל, ואת הירידה בהומאוסטזיס מטבולי10,11. D. melanogaster, המכונה זבוב הפירות, חולק רמה גבוהה של הומולוגיה גנטית עם בני אדם; מאמינים כי לכ-75% מהגנים של מחלות אנושיות יש הומולוג פונקציונלי בזבוב12. יש להם גם מערכת עיכול פשוטה המורכבת ממעי קדמי, מעי בינוני ומעי אחורי13. D. melanogaster קל לתרבית במעבדה וניתן להנדס גנטית בדרכים שונות14. לכן, שימוש ב- D. melanogaster לבדיקת in vivo הוא כלי רב עוצמה המאפשר לחוקרים לחקור תהליכים ביולוגיים מורכבים בסביבה מבוקרת.
על פי ארגון הבריאות העולמי (WHO), כ -80% מהאנשים החיים במדינות מתפתחות משתמשים ברפואה מסורתית לצורכי הבריאות העיקריים שלהם15. השימוש הגבוה בצמחי מרפא יכול להיות מוסבר בכך שהם זמינים בקלות, זולים, ויש להם מעט תופעות לוואי16. חלקי הצמח העיקריים המשמשים בטיפול צמחי כוללים עלים, קליפה, שורשים, זרעים17 בעוד שיטות ההכנה העיקריות הן עירוי, מרתח ו maceration18. תרופות צמחיות אלה מכילות חומרים פיטוכימיים כגון אלקלואידים, טרפנואידים, פלבנואידים, סטרואידים, טאנינים ופחמימות19, שיש להם השפעות טיפוליות על גוף האדם. אנשים משתמשים במגוון צמחי מרפא לטיפול בהפרעות במערכת העיכול כגון שלשולים, כאבי בטן ודיזנטריה20. לדוגמה, Psidium guajava הוא אחד הצמחים הנפוצים ביותר לטיפול בשלשולים בעולם. בדיקות פרמקולוגיות וקליניות שונות כבר הראו את בטיחותו, מה שהופך אותו מועמד טוב נגד שלשולים לחקור21,22. עם זאת, המגבלות העיקריות של תרופות צמחיות הן חוסר יעילות והערכת בטיחות, כמו גם חוסר מידע מוגדר ומלא על הרכב תמציות צמחים בשימוש23. כדי לאמת את היעילות והבטיחות של תרופות צמחיות, נדרשת גישה שיטתית הכוללת תיקוף ניסיוני וקליני והגישה צריכה להיות נתמכת על ידי מספיק נתונים ממחקרי in vivo ו- in vitro.
כדי להעריך תרופות מסורתיות על יעילותן בטיפול בשלשולים, השימוש בעכברים וחולדות היה דומיננטי בעשורים האחרונים24,25. בשל היתרונות העיקריים שהוזכרו קודם לכן, כלומר, קלות שימוש, זול, לשכפל, שמורות פונקציות ספיגה ועיכול בין זבובים ויונקים, אנו מציעים להשתמש D. melanogaster כמודל להערכת פעילות נוגדת שלשולים של צמחים. הפנוטיפ השלשול ב- D. melanogaster יכול להיות מאופיין במספר תכונות, כולל שפע מוגבר של משקעי צואה, גדלי פיקדון גדולים יותר, צבע בהיר יותר (פחות מרוכז), וחומר צואה גבוה יותר26. ניתן לכמת פנוטיפ זה באמצעות פרמטרים שונים: מספר משקעי צואה, שטח כולל של פיקדונות, בהירות ממוצעת, וצפיפות אופטית משולבת כוללת (IOD). סה"כ IOD מוגדר כתכולת הצבע הכוללת של המרבץ, כלומר סך כל החומר הצואתי המופרש27. בעבר, בדיקה פותחה כדי לנתח פיקדונות צואה של ד melanogaster27,28. בבדיקה זו, הקורא האולטימטיבי של גללים (T.U.R.D.) שימש ככלי ניתוח צואה, המאפשר לבדוק את מספר, גודל וקלילות של משקעי צואה ובכך לפקח על הפיזיולוגיה של המעי של זבובי הפירות. עם זאת, שיטה זו מעולם לא יושמה כדי להעריך את הפנוטיפ השלשול בזבובים. הגן Ion Transport Peptide (ITP) הוא מווסת אנדוקריני חשוב של צמא והפרשה ומשלב הומאוסטזיס מים עם הזנה ב-D. melanogaster. במחקר שנערך לאחרונה, הוכח כי מהירות מעבר המזון במערכת העיכול ותדירות אירועי עשיית הצרכים הופחתו על ידי ביטוי יתר של ITP ועלו על ידי הפלה של ITP. הפנוטיפ האחרון תואר כשלשול על ידי מחברי מחקר זה29.
בפרוטוקול זה, גרסה שונה של בדיקת הפקדת צואה משמשת להערכת ההשפעה של סוכן נוגד שלשולים (כלומר, תמצית עלי גויאבה) על מערכת העיכול של D. melanogaster באמצעות זן ITPi כמודל שלשול. המטרה הכוללת של שיטה זו היא: 1) לספק שיטה קלה ואמינה להערכת ההשפעה נוגדת השלשולים של תרופות ותמציות צמחים, 2) לאפשר גילוי של תרכובות ביו-אקטיביות האחראיות להשפעה נוגדת השלשולים בתמציות צמחים על ידי יישום גישה מונחית ביואקטיביות.
1. הכנת תמצית צמחים
2. הכנת מדיום מזון
איור 1: הדגמה של תהליך הניסוי לבדיקת משקעי צואה. (A) תמונה המציגה צלחות פטרי מלאות במדיום מזון. דאגו שיהיה מספיק אוכל בצלחת הפטרי, כך שלא יהיו רווחים שילכדו את הזבובים וימנעו מהם לזוז. עם זאת, אין להעמיס את צלחת פטרי עם מזון, כך פני השטח יכול להיות מכוסה באופן שווה. (ב) תמונה של המרית כמתואר בפרוטוקול. (ג) תמונה של בדיקת הפקדת הצואה כמתואר בפרוטוקול. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
3. הכנת זבובים
4. בדיקת הפקדת צואה
5. כימות צלחות פטרי
איור 2: שלבים מרכזיים בתהליך ניתוח הנתונים מבדיקת הפקדת צואה. (A) צילום מסך המציג את פרטי ההגדרה של יישום הסריקה. (B) תמונות שנחתכו באמצעות היישום Fiji. יש לוודא כי אין חפצים ושאריות מזון נחשבים פיקדונות. (C) צילום מסך המראה כיצד הוא נראה בעת פתיחת היישום Excel_merge-v4. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
6. זיהוי משקעי צואה באמצעות הקורא האולטימטיבי של תוכנת קוד פתוח גללים
הערה: ניתן למצוא את המבוא והשימוש של הקורא האולטימטיבי של תוכנת גללים בקובץ משלים 1.
המחקר המוצג כאן מראה כי מדידת שלשולים ב D. melanogaster ניתן להשיג באמצעות שימוש בבדיקת הפקדת צואה. הבדלים משמעותיים בין הפנוטיפים (שלשוליים או לא) יכולים להיקבע על ידי ניתוח פרמטרים שונים, כולל מספר משקעי הצואה, השטח הכולל של פיקדונות, השטח הממוצע של פיקדונות, הבהירות הממוצעת, ואת הצפיפות האופטית המשולבת הכוללת (IOD), שהיא מדד של כמות הצבע הכוללת הקיימת במרבץ ומייצגת את תכולת החומר הצואה הכוללת המופרשת27.
הפלת הגן ITP בזבובים יכולה לגרום לפנוטיפ שלשול, המאופיין בתדירות מוגברת של עשיית צרכים, מה שהופך אותם למודל מתאים לחקר שלשולים29. בהקשר של ניסוי זה, זן ITPi (w1118; daughterless-GeneSwitch, UAS-ITPi /(CyO)) הופעל וגודל על מדיום סטנדרטי. תמצית עלי Psidium guajava נבחרה כהתערבות נוגדת שלשולים, בהתחשב בשימוש הנרחב של צמח זה באזורים טרופיים לטיפול בשלשולים. קרופלמר, תרופה נוגדת שלשולים, אושרה על ידי מנהל המזון והתרופות האמריקאי (FDA) לספק הקלה סימפטומטית לשלשולים לא זיהומיים בחולים מבוגרים עם HIV / איידס שעברו טיפול אנטי-רטרו-ויראלי31. Crofelemer הוא תמצית מלטקס של Croton lechleri Müll.Arg. קליפת גזע32. לופרמיד היא תרופה סינתטית המשמשת ברחבי העולם לטיפול בשלשולים33. הן קרופלמר והן לופרמיד שימשו כבקרות חיוביות פוטנציאליות.
ההשערה הייתה שהאכלת זבובים בתמצית P. guajava , Crofelemer ו-Loperamide תפחית את הפנוטיפ השלשולי בהשוואה לאלו הניזונים ממזון רגיל. כדי לבחון השערה זו, בוצעה מדידה של משקעי צואה ב- D. melanogaster על ידי השוואת מספר פרמטרים בין זבובים הניזונים ממזון רגיל לבין אלה הניזונים מתמצית P. guajava (1 גרם / 100 מ"ל), קרופלמר (1 גרם / 100 מ"ל) ולופרמיד (10 מ"ל). לצורך מערך הניסוי נעשה שימוש בנקבות או זכרים בתולים בני 6-7 ימים. כל צלחת פטרי הכילה שישה זבובים, ובוצעו שישה העתקים. הזבובים גודלו במשך 24 שעות, ולאחר מכן כל קבוצה נותחה. מבחן t של התלמיד שימש להשוואת ההבדל המשמעותי בין קבוצת המבחן. התוצאות מראות כי מספר משקעי הצואה (איור 3A), השטח הכולל של המרבצים (איור 3B) וה-IOD הכולל (איור 3C) הציגו ערכים גבוהים משמעותית בקבוצת המזון הרגילה בהשוואה לקבוצת תמצית P. guajava (1 גרם / 100 מ"ל), הן בנקבות בתולות והן בזכרים. לרוע המזל, לופרמיד לא הראה כל השפעה בשני המינים (אך כבר הוכח כי הוא פועל כסוכן נוגד עוויתות ב - D. melanogaster)34 בעוד שלקרופלמר הייתה השפעה על נקבות בלבד.
איור 3: ניתוח זני ITPi . זן ITPi נותח תחת ארבעה תנאים: הזנה ממזון רגיל, מזון בתוספת 1 גרם / 100 מ"ל P . guajava לחלץ, 1 גרם / 100 מ"ל Crofelemer, ו 10 mM Loperamide. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD של כל מצב הן בנקבות והן בזכרים (עבור שישה העתקים של שני צדדים של צלחת פטרי). ניתוח סטטיסטי בוצע באמצעות מבחן t של סטודנט שהשווה בין שתי קבוצות. ערכי p מוצגים באופן הבא: *: p < 0.05; **: עמ' < 0.01; p < 0.001, ****: p < 0.0001.: (A) מספר מרבצי הצואה של זן ITPi הושווה בזבובים שניזונו ממזון בתוספת 1 גרם/100 מ"ל קרופלמר, 10 מ"מ לופרמיד, 1 גרם/100 מ"ל תמצית P. guajava ובזבובים שניזונו ממזון רגיל. בנוסף, נותח גם ההבדל במספר משקעי הצואה בין נקבות בתולות לזכרים. בשתי הקבוצות, מספר משקעי הצואה היה גבוה משמעותית בזבובים שניזונו ממזון רגיל מאשר אלה שניזונו מתמצית P. guajava במינון 1 גרם/100 מ"ל. (B) השטח הכולל של מרבצי צואה של זן ITPi הושווה בזבובים שניזונו ממזון רגיל ובזבובים שניזונו ממזון בתוספת 1 גרם/100 מ"ל תמצית P. guajava , 1 גרם/100 מ"ל קרופלמר ו-10 מ"מ לופרמיד. אצל זכרים ונקבות, השטח הכולל של מרבצי הצואה היה גבוה משמעותית בזבובים שניזונו ממזון רגיל מאשר אלה שניזונו מתמצית P. guajava במינון 1 גרם/100 מ"ל. (C) ההבדל ב-IOD הכולל של זן ITPi נותח בין זבובים שניזונו ממזון רגיל לבין זבובים שניזונו ממזון בתוספת 1 גרם/100 מ"ל תמצית P. guajava , 1 גרם/100 מ"ל קרופלמר ו-10 מ"ל לופרמיד. אצל זכרים ונקבות, סך IOD היה גבוה משמעותית בזבובים שניזונו ממזון רגיל מאשר אלה שניזונו מתמצית P. guajava במינון 1 גרם / 100 מ"ל. קיצורים: F = נקבה; M = זכר; קרופה = קרופלמר; לופה = לופרמיד; גם לא מזון = מזון רגיל; P. gua ext = תמצית Psidium guajava . אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
כדי להוכיח שההפרשה המופחתת שנצפתה בקבוצת תמצית P. guajava נובעת מההשפעה המעכבת של התמצית ולא מצריכת מזון מופחתת, ביצענו את שיטת35 להערכת צריכה ישירה ומעקב אחר צריכת מזון מוצק (DIETS). התוצאות הראו שלא היו הבדלים משמעותיים בצריכת המזון בין הקבוצות שסופקו על ידי תרופות לבין אלה ללא תרופות, למעט לופרמיד אצל גברים, שגרם לזבובים לצרוך פחות מזון מהרגיל (איור 4).
איור 4: בדיקת האכלה. בדיקת ההאכלה מדדה צריכת מזון מוצק בזבובים. הזבובים הוזנו בארבעה מדיומים שונים: 1 גרם / 100 מ"ל תמצית P. guajava , 1 גרם / 100 מ"ל Crofelemer, 10 מ"מ Loperamide ומזון רגיל. כל קבוצה כללה 20 זבובים עם חמישה העתקים. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD של כל מצב הן בנקבות והן בזכרים. ניתוח סטטיסטי בוצע באמצעות מבחן t של סטודנט שהשווה בין שתי קבוצות. ערכי p מוצגים באופן הבא: *: p < 0.05; **: עמ' < 0.01; p < 0.001, ****: p < 0.0001.: אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
משקעי הצואה ותוצאות בדיקת ההזנה הראו כי תמצית P. guajava היא צמח מרפא אמין לטיפול בשלשולים בזבובי פירות.
איור משלים 1: חלון הפתיחה של T.U.R.D. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
איור משלים 2: חלון T.UR.D. עם הגדרות שיש לכוונן. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
תרשים משלים 3: חלון T.U.R.D. עם תמונה מבוארת. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
איור משלים 4: חלון T.U.R.D. המציג כל נקודה שזוהתה מתמונה שכבר עובדה. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
תרשים משלים 5: חלון T.U.R.D. המציג כל תמונה מעובדת. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
תרשים משלים 6: חלון T.U.R.D. המציג את תהליך ייצוא הנתונים עבור כל קבוצה. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
קובץ משלים 1: הנחיה מהירה לשימוש בתוכנת T.U.R.D. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
טבלה משלימה 1: דוגמה לגיליונות האלקטרוניים הסופיים המוכנים לניתוח. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
קובץ קידוד משלים 1: בקשה למיזוג גיליונות אלקטרוניים. אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.
D. melanogaster מקובל כמודל לתהליכים ביולוגיים שונים בשל הדמיון בגנים בין D. melanogaster לבני אדם36. השימוש ב- D. melanogaster כמודל לחקר מערכת העיכול נפוץ והיישום של T.U.R.D. שימש להערכת מספר, שטח וכמות משקעי צואה. עם זאת, שיטת הזיהוי הפנוטיפית לא שימשה להערכת השלשולים בזבובי פירות. לכן, פרוטוקול זה מציג שיטה חדשה להעריך בערך את נוכחותם של שלשולים על ידי גילוי פיקדונות צואה.
פיקדונות צואה הם אינדיקטור חיוני לתפקוד מערכת העיכול ובריאות37. בהקשר זה, מוצעת שיטה לגידול D. melanogaster על מדיום המכיל תרופות כדי לחקור פרמטרים שונים של משקעי צואה. על ידי מעקב אחר מספר הפיקדונות, ניתן לקבוע את תדירות הצואה ולהעריך אם לתרופה יש השפעה כלשהי על מעבר המעיים. ניתן למדוד את השטח הכולל של הפיקדונות כדי להעריך את הריכוז והדילול של חומר צואתי, שהוא גורם חשוב בקביעת הבריאות הכללית של מערכת העיכול. בנוסף, ניתן להשתמש בצפיפות האופטית המשולבת הכוללת (IOD) כדי לזהות את הכמות הכוללת של חומר צואה הקיים בפיקדונות. פרוטוקול זה מספק שיטה יעילה לסינון והערכה של תרופות, כמו גם תמציות צמחים המשפיעות על מערכת העיכול. כאשר D. melanogaster משמש כאורגניזם מודל, ניתן להעריך את היעילות של תרופות פוטנציאליות, אשר יכול לעזור להאיץ את תהליך גילוי התרופה. על ידי יישום שיטה זו על תמציות צמחים, חוקרים יכולים לעזור לאמת את השימוש בהם כחומרים נוגדי שלשול.
ישנם מספר צעדים קריטיים שיש לקחת בחשבון בעת שימוש בפרוטוקול זה כדי לחקור משקעי צואה ב- D. melanogaster. ראשית, חיוני לחשב את המסה הנדרשת כדי להשיג את הריכוז הרצוי של התרופה בתווך. יתר על כן, חשוב להבטיח מצב הכנה טוב בעת הוספת התרופה למדיום, שכן טמפרטורות גבוהות יכולות לפגוע בתרופה ולהשפיע על עוצמתה. שנית, בחירת נקבות הזבובים חשובה בפרוטוקול זה. חשוב להשתמש בזבובים נקבות בתולות כדי למנוע את ההבדלים בתפוקת הצואה בין נקבות בתולות לנקבות מזווגות. לדוגמה, הכתמים המיוצרים על ידי נקבות בתולות הם עגולים יותר מאשר נקבות מזווגות, ונקבות מזווגות נוטות להפריש יותר חומר צואתי מאשר נקבות בתולות27,28. לכן, מומלץ לאסוף זבובים לפני 8 שעות של eclosion כדי להבטיח כי כל הנקבות שנאספו הן בתולות. בנוסף, הזבובים שנבדקו צריכים להיות חזקים ובריאים, שכן בריאותם יכולה להשפיע על צריכת המזון ותפוקת הצואה. לדוגמה, זבובים בעלי צורה לא תקינה של כנפיים עשויים להתקשות להשיג את המזון. לבסוף, כדי להשתמש ב- T.U.R.D. בהצלחה, גודל הבלוק (פיקסלים) והגדרות ההסטה הם קריטיים. בשל ההבדל בניגודיות האור של התמונות, ייתכן שיהיה צורך לנסות הגדרות שונות כדי להשיג את הזיהוי הטוב ביותר האפשרי של פיקדונות צואה.
למרות שהשיטה המוצגת יעילה, ישנן מספר מגבלות. האחד הוא דיוק ריכוז התרופה בתווך. כמו המדיום מחומם במהלך ההכנה, כמה מים עשויים להתאדות, אשר יכול להשפיע על ריכוז התרופה. מגבלה נוספת היא סריקת צלחות הפטרי. חלקים מסוימים של צלחות פטרי (כלומר, קצוות) אינם נסרקים, וזה עלול לגרום לחישוב שגוי של סך משקעי הצואה. בנוסף, הזבובים אינם מייצרים את אותה כמות של משקעי צואה על הכיסויים העליונים והתחתונים של צלחות הפטרי. מכיוון שהם נוטים לייצר יותר פיקדונות על הכריכה התחתונה, סטיית התקן של הניתוח בין הכריכה העליונה והתחתונה עשויה להיות גבוהה, מה שעשוי להשפיע על דיוק התוצאות.
באמצעות פרוטוקול זה, חוקרים יכולים לחקור שלשולים ב - D. melanogaster. על ידי שינוי המדיום המכיל תרופה, שיטה זו יכולה לשמש לסינון צמחים נוגדי שלשול, אשר מספק גישה חדשנית לגילוי תרופות. רפואה מסורתית ומוצרים טבעיים שימשו במשך מאות שנים לטיפול במחלות שונות, כולל הפרעות במערכת העיכול. על ידי שימוש בפרוטוקול זה כדי להעריך את היעילות של תמציות צמחים על משקעי צואה, ניתן לזהות טיפולים חדשים פוטנציאליים להפרעות בדרכי העיכול ולספק רציונל מדעי לשימוש בהם כתרופות נוגדות שלשול. גישה זו יכולה לספק תרומה רבת ערך לתחום גילוי תרופות ואתנופרמקולוגיה.
אנו מודים לד"ר מרטינה גליקובה על שסיפקה לנו את זני הדרוזופילה . אנו אסירי תודה לצוות של מישל קרוזטייה-בורדה ומארק האנלין שנתנו משוב על המחקר שלנו ועזרו לנו לשפר את המודל שלנו. ברצוננו להודות לחברת התרופות Napo על שסיפקה לנו את התרופה Crofelemer. המחברים מודים גם לעורך האורח ד"ר Hugues Petitjean על שנתן לנו את ההזדמנות לפרסם פרוטוקול זה. מחקר זה מומן על ידי Agence Nationale de la Recherche (ANR) במסגרת הפרויקט ANR-22-CE03-0001-01.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Chemical & Food medium | |||
Agar | Sigma Aldrich | A7002 | 5 Kg bucket |
Bromophenol blue | Sigma Aldrich | 34725-61-6 | B5525-25G |
Corn flour | Nature et Cie | *910007 | 25 Kg bag |
Crofelemer | Napo pharmaceuticals | - | - |
Ethanol 96% | - | - | - |
Loperamide | Sigma Aldrich | L4762 | 5 grams |
Moldex | VWR | 1.06757.5000 | 5 Kg bag |
Propionic acid | Dutscher | 409553-CER | 1 Liter bottle |
Sugar | Pomona EpiSaveurs | 52705 | 1 Kg bag |
Yeast | Dutscher | 789195 | 10 Kg bag |
Materials | |||
Beaker | DWK LIFE SCIENCE | - | 250 mL |
Centrifugation tube | Eppendorf | 30119401 | Eppendorf tubes 5.0 mL |
CO2 tank | - | - | - |
Erlen Meyer flask | - | - | 500 mL (for extraction) |
Filter paper grade | Whatman | - | 3 mm chr. |
Flowbuddy socle | Genesis | - | - |
Flugs Narrow Plastic vials | Genesis | 49-102 | - |
Flystuff Blow gun | Genesis | - | - |
Flystuff Ultimate Flypad | Genesis | - | - |
Flystuff Foot pedal | Genesis | - | - |
Forceps | Dumostar | 11295-51 | - |
Graduated cylinder | - | - | 100 mL |
Inox spatula | - | - | - |
Micropipette | Eppendorf | 4924000088 | Eppendorf Reference 2 |
Micropipette tip | Eppendorf | 30000919 | epT.I.P.S. Standard |
Narrow Drosophila vials | Genesis | 32-120 | - |
Paintbrush | - | - | - |
Petri dish | Greiner | 628162 | Size: 60 x 15mm |
Round-bottom flask | - | - | 500 mL (for evaporation) |
Thermometer | Avantor | 620-0916 | |
Whisk | - | - | - |
Equipments | |||
Chiller | HUBER | Minichiller | - |
Heating bath | BÜCHI | B-490 | - |
Heating plate | BIOBLOCK SCIENTIFIC | - | Magnetic stirrer hot plate |
Incubator | Memmert | - | HPP110eco |
Rotary evaporator | BÜCHI | R-200 | - |
Scanner | Epson | V850 pro | - |
Shaker | Edmund Bühle | KS 10 | - |
Stereomicroscope binocular | Zeiss | Stemi 305 | - |
Vacuum pump | VACUUBRAND | PC500 series | - |
Vortex mixer | Sigma Aldrich | CLS6776-1EA | Corning LSE vortex mixers |
Weighing scale | OHAUS Scout | SKX622 | - |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved