A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
פרוטוקול זה מציג שיטה חסכונית ויעילה להערכה כמותית של מיקרו-ארכיטקטורה של עצם במודל עכברי של אוסטאופורוזיס על ידי שילוב של צביעת Hematoxylin-Eosin (HE) וטכניקות טומוגרפיה מיקרו-ממוחשבת (Micro-CT).
מיקרו-מבנה עצם מתייחס לסידור ואיכות רקמת העצם ברמה המיקרוסקופית. הבנת מיקרו-מבנה העצם של השלד חיונית להשגת תובנה לגבי הפתופיזיולוגיה של אוסטאופורוזיס ושיפור הטיפול בה. עם זאת, טיפול בדגימות עצם יכול להיות מורכב בשל תכונותיהן הקשות והצפופות. שנית, תוכנה מיוחדת מקשה על עיבוד וניתוח תמונה. בפרוטוקול זה, אנו מציגים פתרון חסכוני וקל לשימוש לניתוח מיקרו-מבנה עצם טרבקולרית. צעדים מפורטים ואמצעי זהירות מסופקים. Micro-CT היא טכניקת הדמיה תלת-ממדית (תלת-ממדית) לא הרסנית המספקת תמונות ברזולוציה גבוהה של מבנה העצם הטרבקולרית. היא מאפשרת הערכה אובייקטיבית וכמותית של איכות העצם, ולכן היא נחשבת לשיטת תקן הזהב להערכת איכות העצם. עם זאת, היסטומורפומטריה נותרה הכרחית מכיוון שהיא מציעה פרמטרים חיוניים ברמת התא, המגשרת על הפער בין הערכות דו-ממדיות (2D) ותלת-ממדיות של דגימות עצם. באשר לטכניקות ההיסטולוגיות, בחרנו להסיר את רקמת העצם ולאחר מכן לבצע הטבעה מסורתית של פרפין. לסיכום, שילוב של שתי שיטות אלה יכול לספק מידע מקיף ומדויק יותר על מיקרו-מבנה העצם.
אוסטאופורוזיס היא מחלת עצם מטבולית נפוצה, במיוחד בקרב קשישים, והיא קשורה לסיכון מוגבר לשברים שבירים. ככל שאוסטאופורוזיס הופך נפוץ יותר בסין1, יהיה ביקוש גובר לחקר מבני העצם של בעלי חיים קטנים 2,3. השיטות הקודמות למדידת אובדן עצם מסתמכות על התוצאות של ספיגת קרני רנטגן דו-ממדית באנרגיה כפולה. עם זאת, זה לא לוכד את השינויים במיקרו-מבנה האדריכלי של עצם הטרבקולר, שהוא גורם מפתח לחוזק השלד4. המיקרו-מבנה של העצם משפיע על חוזקה, נוקשותה ועמידותה בפני שברים. על ידי השוואת מיקרו-ארכיטקטורה של עצם במצבים נורמליים ופתולוגיים, ניתן לזהות שינויים במורפולוגיה, במבנה ובתפקוד של ....
פרוטוקול בעלי החיים אושר על ידי הוועדה האתית לבעלי חיים של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (מספר שיא: 2020-34). נקבות עכברי C57BL/6J (בנות 12 שבועות, n = 14) חולקו לשתי קבוצות באופן אקראי, קבוצה המופעלת על ידי דמה (קבוצת Sham, n = 7) וקבוצת מודל (קבוצת OVX, n = 7). בעלי החיים נרכשו מספק מסחרי (ראו טבלת חו.......
ניתוח מיקרו-CT
מדדנו את הפרמטרים המיקרו-אדריכליים הטרבקולריים בעכברים משתי הקבוצות ודיווחנו על הערכים הממוצעים שלהם ועל SDs בטבלה 1. ההתפלגות של כמה פרמטרים (כלומר, היחס בין נפח העצם לנפח הרקמה הכולל, עובי טרבקולרי, הפרדה טרבקולרית) בתוך כל קבוצה מודגמת ?.......
אוסטאופורוזיס יכול להוביל לשברים תכופים, שהם יקרים, יכולים לגרום לכאב, נכות או אפילו מוות, ולהשפיע קשות על איכות החיים של חולים20. במהלך השנים הוכר מודל כריתת השחלות כאחת השיטות הסטנדרטיות לחקר אוסטאופורוזיס21. המודל הפרה-קליני הנפוץ ביותר בבעלי חיים לאוסטאופורוז?.......
למחברים אין מה לחשוף.
עבודה זו נתמכה על ידי המנהל המחוזי של סצ'ואן לרפואה סינית מסורתית (2021YJ0175) ופרויקט חדשנות המחקר לתארים מתקדמים של בית הספר לרפואה קלינית (LCYJSKT2023-11), אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
4% Paraformaldehyde | Biosharp | BL539A | |
Adobe Photoshop | Adobe Inc. | ||
Ammonia Solution | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2021070101 | |
Analyze 12.0 | AnalyzeDirect, Inc | ||
Anatomical Forceps | Jinzhong surgical instrument Co., Ltd | J3C030 | |
Anhydrous Ethanol | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022070501 | |
Automatic Dyeing Machine | Thermo scientific | Varistain™ Gemini ES | |
Bone Microarchitecture Analysis Add-on | AnalyzeDirect, Inc | ||
C57BL/6J mice | SPF (Beijing) Biotechnology Co., Ltd. | ||
Carrier Slides | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd | 220518001 | |
Coverslips | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co. | 220518001 | |
Decalcification Solution | Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | CR2203047 | |
Delicate Scissors | Jinzhong surgical instrument Co., Ltd | ZJA010 | |
Embedding box marking machine | Thermo scientific | PrintMate AS | |
Embedding Machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
Fiji: ImageJ | National Institutes of Health, USA | ||
Film Sealer | Thermo scientific | Autostainer 360 | |
Freezing Table | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
H&E Staining Kit | Leagene | DH0020 | |
Hydrochloric Acid Solution | Sichuan Xilong Science Co., Ltd | 210608 | |
ImageJ2 Plugin | BoneJ 7.0.16 | ||
Medical Gauze | Shandong Ang Yang Medical Technology Co. | ||
Mersilk 3-0 Silk Braided Non-Absorbable Sutures | Ethicon, Inc. | SA84G | |
Needle Holder | Jinzhong surgical instrument Co., Ltd | J32010 | |
Neutral Balsam | Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd | 10004160 | |
Oven | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
PANNORAMIC Digital Slide Scanners | 3DHISTECH Ltd. | PANNORAMIC DESK/MIDI/250/1000 | |
PBS buffer | Biosharp | G4202 | |
Povidone-iodine solution 5% | Chengdu Yongan Pharmaceutical Co., Ltd | ||
Quantum GX2 microCT Imaging System | PerkinElmer, Inc. | ||
Rotary Microtome | Thermo scientific | HM325 | |
Scalpel | Quanzhou Excellence Medical Co., Ltd | 20170022 | |
Scan & Browse Software | 3DHISTECH Ltd. | CaseViewer2.4 | |
Single-Use Sterile Rubber Surgical Gloves | Guangdong Huitong Latex Products Group Co., Ltd | 22B141EO | |
Sodium Chloride Solution 0.9% | Sichuan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd | ||
Sterile Hypodermic Syringes for Single Use | Shandong Weigao Group Medical Polymer Products Co., Ltd | ||
Sterile Medical Suture Needles | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd. | PW8068 | |
Tissue Processor | Thermo scientific | STP420 ES | |
Tissue Spreading and Baking Machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
Tribromoethanol | Nanjing Aibei Biotechnology Co., Ltd | M2920 | |
Wax Trimmer | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JXL-818 | |
Xylene | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022051901 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved