Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Этот протокол описывает применение антимикробной фотодинамической терапии (ФДТ) на мышиной модели кандидоза полости рта. ФДТ проводили с использованием водорастворимой смеси куркуминоидов и синего светодиодного света.

Abstract

Антимикробная фотодинамическая терапия (ФДТ) была широко исследована in vitro, а доклинические модели инфекций на животных подходят для оценки альтернативных методов лечения до клинических испытаний. В этом исследовании описывается эффективность аФДТ на мышиной модели кандидоза полости рта. Сорок мышей были иммуносупрессивно введены с помощью подкожных инъекций преднизолона, а их языки были инокулированы с помощью мазка из ротовой полости, предварительно смоченного в клеточной суспензии C. albicans . В ходе эксперимента тетрациклин вводили с питьевой водой. Через пять дней после инокуляции грибка мыши были случайным образом распределены на восемь групп; Девятая группа необработанных неинфицированных мышей была включена в качестве отрицательного контроля (n = 5). Три концентрации (20 мкМ, 40 мкМ и 80 мкМ) смеси куркуминоидов были протестированы с синим светодиодным светом (89,2 мВт/см2; ~455 нм) и без света (группы C+L+ и C+L- соответственно). В качестве контрольной группы оценивали только свет (C-L+), отсутствие лечения (C-L-) и животных без инфекции. Данные анализировали с помощью тестов Уэлча ANOVA и Геймса-Хауэлла (α = 0,05). Кандидоз полости рта был установлен у всех инфицированных животных и визуализировался макроскопически по наличию характерных белых пятен или псевдомембран на тыльной стороне языка. Гистопатологические срезы подтвердили большое присутствие дрожжей и филаментов, ограниченных ороговевшим слоем эпителия в группе C-L-, а присутствие грибковых клеток было визуально снижено на изображениях, полученных от мышей, подвергшихся ФДТ куркуминоидами 40 мкМ или 80 мкМ. ФДТ, опосредованная 80 мкМ куркуминоидами, способствовала снижению количества колоний на 2,47 log10 по сравнению с таковыми в группе C-L- (p = 0,008). Во всех остальных группах не было выявлено статистически значимого снижения количества колоний, включая группы фотосенсибилизаторов (C+L-) или только света (C-L+). Куркуминоид-опосредованная аФДТ снижала грибковую нагрузку от языков мышей.

Introduction

Кандидоз полости рта (ОК) – основная грибковая инфекция ротовой полости; это вызвано чрезмерным ростом Candida spp. Предрасполагающие факторы к ОК включают эндокринную дисфункцию, применение антибиотиков широкого спектра действия, радио- и химиотерапию, дефицит питательных веществ, ксеростомию (низкий поток слюны), ношение зубных протезов, плохую гигиену и, особенно, иммуносупрессию1. Среди видов Candida Candida albicans является наиболее распространенным и вирулентным; Он обнаруживается в организме человека как комменсальный вид и как условно-патогенный микроорганизм. C. albicans обладает способностью изменя....

Protocol

Протокол исследования по использованию мышей был одобрен Комитетом по этике использования животных (номера дел 05/2008 и 09/2020) в Школе стоматологии, Араракура, UNESP. В качестве референтного штамма использовали C. albicans (ATCC 90028). Для настоящего исследования были использованы шестинедельны?.......

Representative Results

Мышиная модель ОК показала типичные белые пятна и псевдомембраны на языке всех инфицированных мышей (рис. 4А). У C. albicans, полученных от C-L- животных, подтверждена колонизация тканей этим микроорганизмом (значения варьировали от 1,62 x 104 до 4,80 x 10,5 КОЕ/мл). Как и .......

Discussion

C. albicans ассоциировался с инфекциями полости рта и пищевода у лиц с ослабленным иммунитетом, сахарным диабетом, длительным приемом антибиотиков и плохой гигиеной полости рта 1,3. Изучение инфекционных заболеваний человека требует исследований как in.......

Acknowledgements

Авторы благодарят за финансовую поддержку FAPESP (Исследовательский фонд Сан-Паулу, номер процесса FAPESP #2013/07276-1 (CePID CePOF) и 2008/00601-6. Мы также благодарим доктора Ану Паулу Сильва за предоставленную информацию о водорастворимой соли на основе CUR.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
C. albicansATCC (Rockville, Md, USA)90028Used to prepare the Candida inoculum
Centrifuge Eppendorf Centrifuge 5804/5804R,B. Braun, Melsungen, Hesse, Germany022628146 (NA)Used to prepare the Candida inoculum
Chlorpromazine chloride 2 mg/mLCompounding pharmacy, Araraquara, SP, Brazil -  Used to sedate animals during candida inoculation
Curcumin-based water-soluble saltPDTPharma, Cravinhos, Brazil - Consisting of 53.4% of natural curcumin, and  46.6% of other curcuminoids (demethoxycurcumin and bis-demethoxycurcumin). Prepared in water and N-MethylD-Glucamine (final average molecular weight of 730.32 g.mol−1)
Digital colony counterCP 600 Plus, Phoenix Ind Com Equipamentos Científicos Ltda, Araraquara, SP, Brazil - Used to count colonies on agar plates
Extruded mouse chowBenelab food, Industry Qualy Animal Nutrition and Commerce Ltda., Lindóia, São Paulo State, Brazil. -Used for the feeding of the mice
Ketamine Hydrochloride 10%Ketamina Agener, União Química Farmacêutica Nacional S/A, Embu-Guaçu, SP, Brazil - Used to anesthetize animals before  treatments and for euthanasia
Light-emitting diode handpiece (prototype)Instituto de Física de São Carlos, University of São Paulo, São Carlos, SP, Brazil - Fabricated with LXHL-PR09, Luxeon III Emitter, Lumileds Lighting, San Jose, California, USA
Methylprednisolone acetate 40 mgDEPO-MEDROL, Pfizer, New York - Used as an immunosuppressant
MicrotomeLeica Microsystems, Bannockburn, IL, USASM2500Used to cut the serial sections of the tongues
Propylene boxes (cages housing) H13 x L20 x D30 cmBonther Equipaments, Ribeirão Preto, SP, Brazil - Used to keep the animals throughout  the experimental period
Sabouraud Dextrose Agar with ChloramphenicolHiMedia, Mumbai, IndiaMM1067-500GCulture medium for yeast growth (agar)
SpectrophotometerSpectrophotometer Kasvi K37-VIS , São José dos Pinhais, PR, BrazilK37-VIS Used to standardize the inoculum concentration
Tetracycline hydrochloride Compounding pharmacy, Araraquara, SP, Brazil - Antibiotic given to induce oral dysbiosis
Wood shavingsJ.R. Wood Shavings, Comerce of Sawdust Ltda., Conchal, São Paulo State, Brazil -Used for floor covering inside the housing boxes
Xylazine 2%Calmiun, União Química Farmacêutica Nacional S/A, Embu-Guaçu, SP, Brazil - Used in combination with ketamine for anesthesia
Yeast Nitrogen Broth Difco, InterLab, Detroit, MI, USADF0919-07-3 Culture medium for yeast growth (broth)
Yeast Peptone Dextrose BrothNutriSelect Basic, Sigma AldrichY1375Culture medium for maintaining the strains at -80°C and grow

References

  1. Vila, T., Sultan, A. S., Montelongo-Jauregui, D., Jabra-Rizk, M. A. Oral candidiasis: a disease of opportunity. Journal of fungi (Basel, Switzerland). 6 (1), 15 (2020).
  2. Sudbery, P. E. Growth of Candida albicans hyphae. Nature Reviews Microbi....

Explore More Articles

APDTin vitroC albicansANOVA

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved