Optimalisering av musens primære linseepitelcellekultur: En omfattende guide til trypsinisering

Linseepitelceller (LEC) spiller flere viktige roller for å opprettholde homeostase og normal funksjon av linsen. LEC bestemmer linsevekst, utvikling, størrelse og gjennomsiktighet. Omvendt kan dysfunksjonelle LEC føre til kataraktdannelse og bakre kapselopacifisering (PCO). Derfor er etablering av et robust primært LEC-kultursystem viktig for forskere som er engasjert i linseutvikling, biokjemi, kataraktbehandling og PCO-forebygging. Dyrking av primære LEC-er har imidlertid lenge bydd på utfordringer på grunn av deres begrensede tilgjengelighet, langsomme spredningshastighet og delikate natur.

Denne studien adresserer disse hindringene ved å presentere en omfattende protokoll for primær LEC-kultur. Protokollen omfatter viktige trinn som formulering av et optimalisert kulturmedium, presis isolering av linsekapsler, trypsiniseringsteknikker, subkulturprosedyrer, høstprotokoller og retningslinjer for lagring og forsendelse. Gjennom hele dyrkningsprosessen ble cellemorfologi overvåket ved hjelp av fasekontrastmikroskopi.

For å bekrefte ektheten av de dyrkede LECene ble immunfluorescensanalyser utført for å oppdage tilstedeværelsen og subcellulær fordeling av kritiske linseproteiner, nemlig a- og γ-krystalliner. Denne detaljerte protokollen utstyrer forskere med en verdifull ressurs for å dyrke og karakterisere primære LECs, noe som muliggjør fremskritt i vår forståelse av linsebiologi og utvikling av terapeutiske strategier for linserelaterte lidelser.