Эффективный и быстрый метод маркировки и анализа клубочков мышей

Summary

В этом исследовании представлен простой в использовании, полный и простой набор методов для маркировки и анализа клубочков из почек мышей, очищенных с помощью CUBIC. Такие данные, как количество и объем клубочков, могут быть легко и надежно получены с помощью флуоресцеина изотиоцианата (FITC)-декстрана, флуоресцентной микроскопии со световым листом (LSFM) или обычной конфокальной микроскопии и программного обеспечения, такого как Imaris.

Abstract

Клубочки являются основными единицами в почках; Следовательно, изучение клубочков имеет решающее значение для понимания функции почек и патологии. Биологическая визуализация предоставляет интуитивно понятную информацию; Таким образом, большое значение имеет маркировка и наблюдение за клубочками. Однако используемые в настоящее время методы наблюдения клубочков требуют сложных операций, и результаты могут потерять детали меток или трехмерную (3D) информацию. Технология очистки тканей с четкой, беспрепятственной визуализацией мозга и вычислительным анализом (CUBIC) широко используется в почечных исследованиях, обеспечивая более точное обнаружение и большую глубину обнаружения. Мы обнаружили, что клубочки мышей могут быть быстро и эффективно помечены путем инъекции в хвостовую вену среднемолекулярного FITC-декстрана с последующим методом очистки CUBIC. Очищенная почка мыши может быть отсканирована с помощью светового микроскопа (или конфокального микроскопа при разрезе), чтобы получить трехмерные изображения всех клубочков во всей почке. Обработанные с помощью соответствующего программного обеспечения, сигналы клубочков могут быть легко оцифрованы и дополнительно проанализированы для измерения количества, объема и частоты клубочков.

Introduction

Количество и объем клубочков очень важны для диагностики и лечения различных заболеваний почек 1,2,3,4,5. Золотым стандартом оценки числа клубочков является комбинация физического диссектора и фракционатора. Однако этот метод требует специальных реагентов и оборудования, что делает его медленным и дорогим 6,7,8,9. Биопсия дает много информации, но очевидно, что этот метод подходит....

Protocol

В исследовании использовали взрослых мышей C57BL/6 (6-недельный возраст, 25-30 г). Все процедуры были выполнены в соответствии с местными правилами благополучия животных и экспериментальной этики. Исследование было одобрено Комитетом по этике биомедицинских исследований Западно-Китайской ?.......

Discussion

Тканевые очистительные технологии можно разделить на 3 или 4 группы 29,30,31. Очищение тканей на основе органических растворителей (например, DISCO и PEGASOS), очищение тканей на водной основе (например, CUBIC) и очистка тканей с внедрением гидрогеля.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
4% PFA	Biosharp	7007171800	Fixation reaagen
502 Glue	Deli	7146	For fixing the kidney to the sample fixing adapter
Antipyrine	Aladdin	A110660	Clearing reagent
Brain Matrix	RWD Life Science	1mm 40-75	Tissue slicing
Confocal microscopy	Nikon	A1plus	Image acquisition
FITC-Dextran	Sigma-Aldrich	FD150S	Labeling reagent
Light sheet fluorescence microscopy	Zeiss	Light sheet 7	Image acquisition
Mice	Ensiweier		Adult C57BL/6 mice (6 weeks of age, 25–30 g)
N-Butyldiethanolamine	Aladdin	B299095	Clearing reagent
Nicotinamide	Aladdin	N105042	Clearing reagent
Pentobarbital Natriumsalz	Sigma-Aldrich	P3761
Tail vein fixator	JINUOTAI	JNT-FS35	Fix the mouse for vail injection
Triton X-100	Sigma-Aldrich	T8787	Clearing reagent