果蝇菌株的原始生殖细胞冷冻保存和复兴

果蝇 菌株必须通过频繁地将成年果蝇转移到新的小瓶中来维持。这带来了突变恶化和表型变化的危险。因此，开发一种无需此类更改即可长期保存的替代方法势在必行。尽管以前有过成功的尝试，但由于可重复性低， 果蝇 胚胎的冷冻保存仍然没有实际用途。在这里，我们描述了一种通过将冷冻保存的PGC移植到非配子 果蝇黑腹 果蝇（D. melanogaster）宿主胚胎中来冷冻保存和菌株复兴的方案。PGC对冷冻保护剂（CPA）具有高度渗透性，菌株之间的发育和形态变异比胚胎冷冻保存中的问题要小。在这种方法中，从大约30个供体胚胎中收集PGC，在CPA处理后加载到针中，然后在液氮中冷冻保存。为了产生供体来源的配子，将针头中冷冻保存的PGC解冻，然后沉积到大约15个非配子宿主胚胎中。使用该协议实现了至少15%的可育果蝇的频率，并且每对可育夫妇的后代数量总是足以恢复原始菌株（平均后代数量为77.2±7.1），表明冷冻保存的PGC具有成为生殖干细胞的能力。每针平均可育果蝇数量为1.1±0.2只，26根针中有9只产生两个或两个以上的可育后代。结果发现，11根针足以产生6个或更多的后代，其中可能至少包括一名雌性和一名雄性。非配属宿主可以通过简单地将新出现的雌性和雄性苍蝇杂交来快速恢复菌株。此外，PGC具有用于基因工程应用的潜力，例如基因组编辑。