Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

הפרוטוקולים הנוכחיים מתארים הדמיה חדשה של הר שלם להדמיית מבנים היקפיים בעדשת העין עם שיטות לכימות תמונה. פרוטוקולים אלה יכולים לשמש במחקרים כדי להבין טוב יותר את הקשר בין מבנים מיקרוסקולריים של עדשה לבין התפתחות/תפקוד עדשה.

Abstract

עדשת העין היא רקמה גמישה שקופה המשנה את צורתה כדי למקד אור ממרחקים שונים על הרשתית. מלבד קרום מרתף המקיף את האיבר, הנקרא קפסולה, העדשה היא תאית לחלוטין המורכבת משכבה אחת של תאי אפיתל בחצי הכדור הקדמי וממסה גדולה של תאי סיבי עדשה. במהלך החיים, תאי אפיתל מתרבים באזור הנביטה בקו המשווה של העדשה, ותאי אפיתל משווניים נודדים, מתארכים, ומתמיינים לתאי סיבים שזה עתה נוצרו. תאי אפיתל משווניים משנים באופן משמעותי את המורפולוגיה מתאים בצורת אבן מרוצפת דחוסה באופן אקראי לתאים מיושרים בצורת משושה היוצרים שורות מרידיונליות. תאי סיבי עדשה חדשים שנוצרו שומרים על צורת התא המשושה ומתארכים לכיוון הקוטב הקדמי והאחורי, ויוצרים קליפה חדשה של תאים המונחים על דורות קודמים של סיבים. מעט ידוע על המנגנונים המניעים את המורפוגנזה יוצאת הדופן של תאי אפיתל עדשה לתאי סיבים. כדי להבין טוב יותר את מבנה העדשה, התפתחותה ותפקודה פותחו פרוטוקולי הדמיה חדשים כדי לדמות מבנים היקפיים באמצעות תושבות שלמות של עדשות עיניים. כאן מוצגות שיטות לכימות עובי הקפסולה, שטח תא אפיתל, אזור וצורה גרעיניים של התא, סדר ואריזה של תאי שורה מרידיאליים ורוחב תאי סיבים. מדידות אלה חיוניות להבהרת השינויים התאיים המתרחשים במהלך צמיחת העדשה לכל החיים ולהבנת השינויים המתרחשים עם הגיל או הפתולוגיה.

Introduction

עדשת העין היא רקמה גמישה ושקופה הממוקמת באזור הקדמי של העין ומתפקדת למיקוד עדין של האור על הרשתית. ניתן לייחס את יכולתה של העדשה לתפקד, בין השאר, לארכיטקטורה המורכבת שלהולארגון 1,2,3,4,5,6. סביב רקמת העדשה נמצאת הקפסולה, קרום מרתף חיוני לשמירה על מבנה העדשה ותכונות ביומכניות 7,8,9. העדשה עצמה היא תאית לחלוטין, ומורכבת משני סוגי תאים: תאי אפיתל ותאי סיבים. שכבת האפיתל מורכבת משכבה ....

Protocol

עכברים שוכנים במתקן בעלי חיים של אוניברסיטת דלאוור, המתוחזקים בסביבה נטולת פתוגנים. כל ההליכים בבעלי חיים, כולל המתת חסד על ידי שאיפת CO2 , נערכו בהתאם לפרוטוקולים מאושרים של בעלי חיים על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת דלאוור (IACUC).

1. הכנה והד.......

Representative Results

קפסולת עדשה קדמית, אזור תאי אפיתל ואזור גרעיני
כדי לנתח את עובי קפסולות העדשה, צבענו קפסולות עדשה, בעדשות חיות או קבועות, עם WGA. זיהינו תאי אפיתל של עדשה על-ידי תיוג קרומים עם tdTomato בעדשות חיות (איור 2A), או באמצעות צביעת רודמין-פלואידין עבור F-actin בקרומי התאים בעדשות ק.......

Discussion

הפרוטוקולים המתוארים מאפשרים הדמיה ברזולוציה מרחבית גבוהה של מבני ותאים היקפיים של העדשה באזורים הקדמיים והמשווניים של העדשה. במחקר זה הוצגו שיטות להדמיה של מבנים היקפיים של עדשה באמצעות עדשות שלמות (חיות או קבועות) שבהן נשמרת ארכיטקטורת העדשה התלת-ממדית הכוללת. בנוסף, סופקו שיטות פשוטו?.......

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לעיניים מענק R01 EY032056 CC ו- R01 EY017724 ל- VMF, כמו גם המכון הלאומי למדעי הרפואה הכלליים תחת מענק מספר P20GM139760. S.T.I נתמך על ידי NIH-NIGMS T32-GM133395 כחלק מתוכנית ההכשרה הקדם-דוקטורנטית של ממשק כימיה-ביולוגיה, ועל ידי פרס חוקרים לתארים מתקדמים של אוניברסיטת דלאוור.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
3 mm Biopsy PunchAcuderm IncNC9084780
AgaroseApex BioResearch Products20-102GP
Antimycotic/AntibioticCytivaSV30079.01
Bovine Serum Albumin (Fraction V)Prometheus25-529
Delicate task wipesKimwipe
Glass bottomed dish (Fluorodish)World Precision InternationalFD35-100
Hoescht 33342Biotium40046
Laser scanning confocal Microscope 880Zeiss
MatTek Imaging DishMatTek Life SciencesP35G-1.5-14
Paraformaldehyde Electron Microscopy Sciences100503-917
PBSGenClone25-507B
Phenol red-free medium 199Gibco11043023
Rhodamine-PhalloidinThermo Fisher00027
Triton X100Sigma-Aldrich11332481001
WGA-640BiotiumCF 640R

References

Explore More Articles

203

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved