Визуализация всего крепления для визуализации и количественной оценки структуры периферического хрусталика, морфологии и организации клеток

В представленных протоколах описаны новые методы визуализации с помощью всей монтировки для визуализации периферических структур в окулярном хрусталике с методами количественной оценки изображения. Эти протоколы могут быть использованы в исследованиях, чтобы лучше понять взаимосвязь между микромасштабными структурами хрусталика и развитием/функцией хрусталика.

Окулярная линза представляет собой прозрачную гибкую ткань, которая изменяет свою форму, чтобы фокусировать свет с разных расстояний на сетчатке. За исключением базальной мембраны, окружающей орган, называемой капсулой, хрусталик полностью клеточный, состоящий из монослоя эпителиальных клеток в переднем полушарии и объемной массы клеток волокон хрусталика. На протяжении всей жизни эпителиальные клетки пролиферируют в зародышевой зоне на экваторе хрусталика, а экваториальные эпителиальные клетки мигрируют, удлиняются и дифференцируются во вновь образованные волоконные клетки. Экваториальные эпителиальные клетки существенно изменяют морфологию от хаотично упакованных булыжных клеток к выровненным шестиугольным клеткам, образующим меридиональные ряды. Вновь сформированные клетки волокон хрусталика сохраняют гексагональную клеточную форму и удлиняются к переднему и заднему полюсам, образуя новую оболочку клеток, которые накладываются на предыдущие поколения волокон. Мало что известно о механизмах, которые управляют замечательным морфогенезом эпителиальных клеток хрусталика в волоконные клетки. Для лучшего понимания структуры, развития и функционирования хрусталика были разработаны новые протоколы визуализации периферических структур с использованием целых креплений окулярных линз. Здесь показаны методы количественной оценки толщины капсулы, площади эпителиальных клеток, площади и формы ядра клетки, меридионального порядка и упаковки клеток, а также ширины клеток волокна. Эти измерения необходимы для выяснения клеточных изменений, которые происходят во время роста хрусталика на протяжении всей жизни, и понимания изменений, которые происходят с возрастом или патологией.

Окулярная линза представляет собой гибкую, прозрачную ткань, расположенную в передней части глаза, которая функционирует для точной фокусировки света на сетчатке. Способность объектива функционировать можно объяснить, в частности, его сложной архитектурой и организацией 1,2,3,4,5,6. Ткань хрусталика окружает капсула, базальная мембрана, необходимая для поддержания структуры хрусталика и биомеханических свойств ^7,8,9

Мыши содержатся в помещении для животных Университета штата Делавэр, где содержатся в среде, свободной от патогенов. Все процедуры для животных, включая эвтаназию путем ингаляции_CO2 , проводились в соответствии с протоколами, утвержденными Комитетом по уходу за животными и их испо.......

Передняя капсула хрусталика, область эпителиальных клеток и ядерная область
Чтобы проанализировать толщину капсулы хрусталика, мы окрашивали капсулы хрусталика в живые или фиксированные линзы с помощью WGA. Мы идентифицировали эпителиальные клетки хрусталика путем маркиро.......

Описанные протоколы позволяют визуализировать периферические структуры и клетки хрусталика в передней и экваториальной областях хрусталика с высоким пространственным разрешением. В данном исследовании были показаны методы визуализации периферических структур линз с использовани?.......

Эта работа была поддержана грантом R01 Национального института глаз EY032056 для CC и R01 EY017724 для VMF, а также Национальным институтом общих медицинских наук в рамках гранта No P20GM139760. S.T.I был поддержан NIH-NIGMS T32-GM133395 в рамках программы подготовки докторантов Chemistry-Biology Interface, а также премией University of Delaware Graduate Scholars Award.