En magnetisk separationsassisteret højhastighedshomogeniseringsmetode til storskala produktion af endosomafledte vesikler

Ekstracellulære vesikler (EV'er) har tiltrukket sig betydelig opmærksomhed i fysiologisk og patologisk forskning, sygdomsdiagnose og behandling; Deres kliniske oversættelse har imidlertid været begrænset af manglen på opskaleringsfremstillingsmetoder. Derfor tilvejebringer denne protokol en magnetisk separationsassisteret højhastighedshomogeniseringsmetode til storskala produktion af endosomafledte nanovesikler som en ny type exosomefterligninger (EM'er) afledt af endosomerne, som har ca. 100 gange højere udbytte end konventionel ultracentrifugeringsmetode. I denne metode blev magnetiske nanopartikler (MNP'er) internaliseret af forældreceller via endocytose og blev efterfølgende akkumuleret i deres endosomer. Derefter blev MNP-belastede endosomer opsamlet og renset ved hypotonisk behandling og magnetisk adskillelse. En højhastighedshomogenisator blev brugt til at bryde MNP-belastede endosomer i monodisperse nanovesikler. De resulterende endosomafledte vesikler har samme biologiske oprindelse og struktur, kendetegnet ved nanopartikelsporingsanalyse, transmissionselektronmikroskop og western blotting. Deres morfologi og proteinsammensætning ligner native EV'er, hvilket indikerer, at EM'er potentielt kan tjene som en billig og højtydende surrogat af native EV'er til kliniske oversættelser.