מודל Ex Vivo של סרטן השחלות גרורות פריטוניאליות באמצעות Omentum אנושי

Summary

פרוטוקול זה מתאר את הקמתו של מודל אקס ויו תלת-ממדי (3D) של אינטראקציה בין תאים סרטניים ל-omentum. המודל מספק פלטפורמה להבהרת מנגנונים מעודדי גידול בתוך נישת השומן ולבדיקת טיפולים חדשניים.

Abstract

סרטן השחלות הוא הממאירות הגינקולוגית הקטלנית ביותר. האומנטום ממלא תפקיד מפתח במתן מיקרו-סביבה תומכת לתאי סרטן שחלות גרורתיים, כמו גם אותות מודולריים חיסוניים המאפשרים סבילות לגידול. עם זאת, יש לנו מודלים מוגבלים המחקים באופן הדוק את האינטראקציה בין תאי סרטן השחלות ורקמות עשירות בשומן. כדי להבין עוד יותר את המנגנונים התאיים והמולקולריים שבאמצעותם האומנטום מספק מיקרו-סביבה פרו-גידולית, פיתחנו מודל 3D ex vivo ייחודי של אינטראקציה בין תאים סרטניים לאומנטום (omentum). באמצעות אומנטום אנושי, אנו מסוגלים לגדל תאי סרטן שחלות בתוך מיקרו-סביבה עשירה בשומן זו ולנטר את הגורמים האחראים לצמיחת הגידול ולוויסות מערכת החיסון. בנוסף למתן פלטפורמה לחקר מיקרו-סביבה סרטנית עשירה בשומן, המודל מספק פלטפורמה מצוינת לפיתוח והערכה של גישות טיפוליות חדשניות למיקוד תאי סרטן גרורתיים בנישה זו. המודל המוצע קל ליצור, זול וישים לחקירות תרגומיות.

Introduction

סרטן השחלות הוא הממאירות הגינקולוגית הקטלנית ביותר בעולם¹. הסיכון לכל החיים לפתח סרטן זה הוא כ -1 ל -70, כאשר הגיל החציוני של האבחנה הוא 63 שנים². ממאירויות שחלות ראשוניות מסווגות היסטולוגית כאפיתל או לא אפיתל. סרטן שחלות אפיתל (EOC) מייצג מעל 90% מהגידולים, ותת-הסוג הנפוץ ביותר הוא קרצינומה סרוטית בדרגה גבוהה (HGSC), המהווה כ-70%-80% ממקרי EOC. נכון לעכשיו, אין שיטות סינון יעילות כדי לזהות מחלה מוקדם. אז רוב החולים מאובחנים בשלב מתקדם (כלומר, Fédération Internationale de Gynécologie et d'Obstétrique [FIGO] שלב III או IV) לאחר שהסרטן התפשט בכל חלל הצפק².

טיפול סטנדרטי ב....

Protocol

פרוטוקול המחקר הבא נבדק ואושר על ידי מועצת הביקורת המוסדית של אוניברסיטת וויין סטייט (IRB). הסכמה מדעת התקבלה מכל המטופלים לפני הניתוח. איור 1 ממחיש את שלושת השלבים הכלליים בפרוטוקול זה.

1. הכנת רקמת omentum האנושי

1. הכינו תרבית אומנטום (DMEM/F12 + 10% סרום ב?.......

Discussion

באמצעות פרוטוקול זה, פותח מודל פרה-קליני של קרצינומטוזיס פריטוניאלי לסרטן השחלות תוך שימוש בשילוב של טכניקות בסיסיות במבחנה ואקס ויוו. גידול גידול מתקדם נצפה לאורך 50 יום של תרבית משותפת לאחר זריעת דגימות omentum עם mCherry+ OCSC1-F2 תאי סרטן שחלות אנושיים. שיטה זו פותחה ועברה אופטימיזציה ב?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.05% Trypsin-EDTA (1x)	Gibco	25300054
1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needle	BD	329652
10 mL Serological Pipets	CELLTREAT	229010B
100 mm Tissue Culture Dish	Fisherbrand	FB012924
15 mL Centrifuge Tube	CELLTREAT	229411
24 Well Cell Culture Plate	Costar	3524
50 mL Centrifuge Tube	CELLTREAT	229421
75 cm2 Tissue Culture Flask	CELLTREAT	229341
Corning Cell Counter	Corning	9819000
Cytation 5 imager	Biotek
DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium Bicarbonate	Gibco	11320033
Fetal Bovine Serum, Qualified	Gibco	1043028
Matrigel	Corning	356230	Basement membrane matrix
No. 10 Stainless Steel Disposable Scalpel	Integra-Miltex	4410
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140122
Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x)	Gibco	10010023
Revolve microscope	Echo