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Este protocolo descreve o estabelecimento de um modelo tridimensional (3D) ex vivo de interação célula-omento canceroso. O modelo fornece uma plataforma para elucidar mecanismos pró-tumorais dentro do nicho adiposo e para testar novas terapias.
O câncer de ovário é a neoplasia ginecológica mais mortal. O omento desempenha um papel fundamental no fornecimento de um microambiente de suporte para células de câncer de ovário metastático, bem como sinais imunomodulatórios que permitem a tolerância tumoral. No entanto, temos modelos limitados que imitam de perto a interação entre células cancerosas do ovário e tecidos ricos em adiposo. Para entender melhor os mecanismos celulares e moleculares pelos quais o omento fornece um microambiente pró-tumoral, desenvolvemos um modelo 3D ex vivo único de interação célula-omento cancerígeno. Usando omento humano, somos capazes de cultivar células cancerosas de ovário dentro deste microambiente rico em adiposo e monitorar os fatores responsáveis pelo crescimento do tumor e regulação imunológica. Além de fornecer uma plataforma para o estudo deste microambiente tumoral rico em adiposo, o modelo fornece uma excelente plataforma para o desenvolvimento e avaliação de novas abordagens terapêuticas para atingir células cancerosas metastáticas neste nicho. O modelo proposto é de fácil geragem, barato e aplicável a investigações translacionais.
O câncer de ovário é a neoplasia maligna ginecológica mais letal domundo1. O risco ao longo da vida de desenvolver esse câncer é de aproximadamente 1 em 70, com mediana de idade de diagnóstico de 63 anos2. Neoplasias ovarianas primárias são classificadas histologicamente como epiteliais ou não epiteliais. Os cânceres epiteliais de ovário (EOC) representam mais de 90% dos tumores, e o subtipo mais comum é o carcinoma seroso de alto grau (HGSC), que responde por aproximadamente 70%-80% dos EOCs. Atualmente, não existem métodos de rastreamento eficazes para detectar a doença precocemente. Assim, a maioria dos pacientes é di....
O seguinte protocolo de pesquisa foi revisado e aprovado pelo Comitê de Revisão Institucional (IRB) da Wayne State University. Todos os pacientes assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido antes da cirurgia. A Figura 1 ilustra as três etapas gerais desse protocolo.
1. Preparação do tecido do omento humano
O estabelecimento bem-sucedido de células de câncer de ovário em espécimes de omento foi evidente por volta do 14º dia (Figura 3A-C). Pelo menos 24 repetições foram preparadas e injetadas por espécime coletado para permitir experimentação adicional. O crescimento tumoral foi monitorado por meio de imagens fluorescentes (Figura 3D,E). As imagens tiveram que ser cuidadosamente interpretadas como uma mono.......
Usando este protocolo, um modelo pré-clínico de carcinomatose peritoneal para câncer de ovário foi desenvolvido usando uma combinação de técnicas básicas in vitro e ex vivo. Um crescimento tumoral progressivo foi observado ao longo de 50 dias de co-cultivo após semeadura de espécimes de omento com células de câncer de ovário humano mCherry+ OCSC1-F2. Este método foi desenvolvido e otimizado em vários ensaios experimentais usando diferentes espécimes de omento. O sucesso do crescimento do.......
O presente estudo é financiado em parte pela The Janet Burros Memorial Foundation. Agradecemos às pacientes e ao Departamento de Oncologia Ginecológica do Instituto do Câncer Karmanos pela coleta das amostras de omento. Também agradecemos ao Biobank e ao Correlative Sciences Core do Karmanos Cancer Institute pela coordenação do recrutamento de pacientes e preparação de lâminas de patologia. O Biobank and Correlative Sciences Core é apoiado em parte pela concessão P30 do NIH Center CA22453 ao Karmanos Cancer Institute da Wayne State University.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.05% Trypsin-EDTA (1x) | Gibco | 25300054 | |
1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needle | BD | 329652 | |
10 mL Serological Pipets | CELLTREAT | 229010B | |
100 mm Tissue Culture Dish | Fisherbrand | FB012924 | |
15 mL Centrifuge Tube | CELLTREAT | 229411 | |
24 Well Cell Culture Plate | Costar | 3524 | |
50 mL Centrifuge Tube | CELLTREAT | 229421 | |
75 cm2 Tissue Culture Flask | CELLTREAT | 229341 | |
Corning Cell Counter | Corning | 9819000 | |
Cytation 5 imager | Biotek | ||
DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium Bicarbonate | Gibco | 11320033 | |
Fetal Bovine Serum, Qualified | Gibco | 1043028 | |
Matrigel | Corning | 356230 | Basement membrane matrix |
No. 10 Stainless Steel Disposable Scalpel | Integra-Miltex | 4410 | |
Penicillin Streptomycin | Gibco | 15140122 | |
Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x) | Gibco | 10010023 | |
Revolve microscope | Echo |
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