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  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Este protocolo descreve o estabelecimento de um modelo tridimensional (3D) ex vivo de interação célula-omento canceroso. O modelo fornece uma plataforma para elucidar mecanismos pró-tumorais dentro do nicho adiposo e para testar novas terapias.

Abstract

O câncer de ovário é a neoplasia ginecológica mais mortal. O omento desempenha um papel fundamental no fornecimento de um microambiente de suporte para células de câncer de ovário metastático, bem como sinais imunomodulatórios que permitem a tolerância tumoral. No entanto, temos modelos limitados que imitam de perto a interação entre células cancerosas do ovário e tecidos ricos em adiposo. Para entender melhor os mecanismos celulares e moleculares pelos quais o omento fornece um microambiente pró-tumoral, desenvolvemos um modelo 3D ex vivo único de interação célula-omento cancerígeno. Usando omento humano, somos capazes de cultivar células cancerosas de ovário dentro deste microambiente rico em adiposo e monitorar os fatores responsáveis pelo crescimento do tumor e regulação imunológica. Além de fornecer uma plataforma para o estudo deste microambiente tumoral rico em adiposo, o modelo fornece uma excelente plataforma para o desenvolvimento e avaliação de novas abordagens terapêuticas para atingir células cancerosas metastáticas neste nicho. O modelo proposto é de fácil geragem, barato e aplicável a investigações translacionais.

Introduction

O câncer de ovário é a neoplasia maligna ginecológica mais letal domundo1. O risco ao longo da vida de desenvolver esse câncer é de aproximadamente 1 em 70, com mediana de idade de diagnóstico de 63 anos2. Neoplasias ovarianas primárias são classificadas histologicamente como epiteliais ou não epiteliais. Os cânceres epiteliais de ovário (EOC) representam mais de 90% dos tumores, e o subtipo mais comum é o carcinoma seroso de alto grau (HGSC), que responde por aproximadamente 70%-80% dos EOCs. Atualmente, não existem métodos de rastreamento eficazes para detectar a doença precocemente. Assim, a maioria dos pacientes é di....

Protocol

O seguinte protocolo de pesquisa foi revisado e aprovado pelo Comitê de Revisão Institucional (IRB) da Wayne State University. Todos os pacientes assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido antes da cirurgia. A Figura 1 ilustra as três etapas gerais desse protocolo.

1. Preparação do tecido do omento humano

  1. Preparar meios de cultura de omento (DMEM/F12 + 10% de soro fetal bovino + 1% de penicilina-estreptomicina) e armazen.......

Representative Results

O estabelecimento bem-sucedido de células de câncer de ovário em espécimes de omento foi evidente por volta do 14º dia (Figura 3A-C). Pelo menos 24 repetições foram preparadas e injetadas por espécime coletado para permitir experimentação adicional. O crescimento tumoral foi monitorado por meio de imagens fluorescentes (Figura 3D,E). As imagens tiveram que ser cuidadosamente interpretadas como uma mono.......

Discussion

Usando este protocolo, um modelo pré-clínico de carcinomatose peritoneal para câncer de ovário foi desenvolvido usando uma combinação de técnicas básicas in vitro e ex vivo. Um crescimento tumoral progressivo foi observado ao longo de 50 dias de co-cultivo após semeadura de espécimes de omento com células de câncer de ovário humano mCherry+ OCSC1-F2. Este método foi desenvolvido e otimizado em vários ensaios experimentais usando diferentes espécimes de omento. O sucesso do crescimento do.......

Disclosures

Os autores não têm nada a revelar.

Acknowledgements

O presente estudo é financiado em parte pela The Janet Burros Memorial Foundation. Agradecemos às pacientes e ao Departamento de Oncologia Ginecológica do Instituto do Câncer Karmanos pela coleta das amostras de omento. Também agradecemos ao Biobank e ao Correlative Sciences Core do Karmanos Cancer Institute pela coordenação do recrutamento de pacientes e preparação de lâminas de patologia. O Biobank and Correlative Sciences Core é apoiado em parte pela concessão P30 do NIH Center CA22453 ao Karmanos Cancer Institute da Wayne State University.

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Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.05% Trypsin-EDTA (1x)Gibco25300054
1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needleBD329652
10 mL Serological PipetsCELLTREAT229010B
100 mm Tissue Culture DishFisherbrandFB012924
15 mL Centrifuge TubeCELLTREAT229411
24 Well Cell Culture PlateCostar3524
50 mL Centrifuge TubeCELLTREAT229421
75 cm2 Tissue Culture FlaskCELLTREAT229341
Corning Cell CounterCorning9819000
Cytation 5 imagerBiotek
DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium BicarbonateGibco11320033
Fetal Bovine Serum, QualifiedGibco1043028
MatrigelCorning356230Basement membrane matrix
No. 10 Stainless Steel Disposable ScalpelIntegra-Miltex4410
Penicillin StreptomycinGibco15140122
Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x)Gibco10010023
Revolve microscopeEcho

References

  1. Siegel, R. L., Miller, K. D., Wagle, N. S., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 73 (1), 17-48 (2023).
  2. Berek, J. S., Renz, M., Kehoe, S., Kumar, L., Friedlander, M. Cancer of the ovary, fallopian tube, and peritoneum: 2021 update.

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