Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

שיטה זו מדגימה ניתוח קטרקט in vivo על ידי הסרת תאי סיבי עדשה מעכברים בוגרים והשארת שקית הקופסית עם תאי אפיתל מחוברים לעדשה (LECs). תגובת הפציעה מוערכת בזמנים שונים לאחר הניתוח באמצעות קריטריונים מולקולריים ומורפולוגיים.

Abstract

ניתוח קטרקט (CS) הוא טיפול יעיל לקטרקט, גורם עיקרי לנכות ראייה ברחבי העולם. עם זאת, ניתוח קיסרי מוביל לדלקת עיניים, ובטווח הארוך, הוא עלול לגרום לפסיפיקציה של הקופסיפיקציה האחורית (PCO) ו / או פריקת עדשה המונעת על ידי צמיחת יתר לאחר ניתוח של תאי אפיתל עדשה (LEC) והפיכתם למיופיברובלסטים ו / או תאי סיבים חריגים. עם זאת, המנגנונים המולקולריים שבאמצעותם CS גורם לדלקת ול- PCO עדיין מעורפלים מכיוון שרוב המודלים במבחנה אינם משחזרים את תגובת ריפוי הפצע של LECs הנראים in vivo, בעוד שמודלים מסורתיים של בעלי חיים של ניתוחי קטרקט, כגון ארנבות, אינם מאפשרים מניפולציה גנטית של ביטוי גנים כדי לבדוק מנגנונים. לאחרונה, המעבדה שלנו ואחרים השתמשו בהצלחה בעכברים מהונדסים גנטית כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים המניעים את השראת האיתות הפרו-דלקתי ואפיתל LEC למעבר מזנכימלי, מה שמוביל לתובנה חדשה לגבי פתוגנזה של PCO. כאן, אנו מדווחים על הפרוטוקול שנקבע למידול ניתוחי קטרקט בעכברים, המאפשר פרופיל שעתוק חזק של תגובת LECs להסרת תאי סיבי עדשה באמצעות RNAseq, הערכת ביטוי חלבונים על ידי אימונופלואורסנציה כמותית למחצה, ושימוש בכלים גנטיים מודרניים של עכברים כדי לבחון את תפקודם של גנים המשערים להשתתף בפתוגנזה של דלקת חריפה כמו sequelae, כמו גם המרה מאוחרת יותר של LECs למיופיברובלסטים ו/או תאי סיבי עדשה חריגים.

Introduction

העדשה היא רקמה מאורגנת ושקופה מאוד השוברת אור כדי לייצר תמונה ממוקדת בבירור על הרשתית 1,2,3. איבר מיוחד זה מוקף בקרום מרתף רצוף (הקפסולה), המבודד את העדשה מחלקים אחרים של העין. המשטח הקדמי הפנימי של הקפסולה מעגן שכבה אחת של תאי אפיתל עדשה (LECs), אשר לאחר מכן מתמיינים בקו המשווה של העדשה לתאי סיבי עדשה, המהווים את הרוב המכריע של עדשה3. קטרקט מתרחש כאשר העדשה מאבדת את שקיפותה עקב גורמים כמו הזדקנות, מוטציה גנטית, קרינת UV, לחץ חמצוני וטראומה עינית4. קטרקט הוא גורם מוביל לעיוורון ברחבי העולם, במיו....

Protocol

הפרוטוקול הבא אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת דלאוור תחת פרוטוקול #1039-2021-1. בהתאם לאגודה לחקר הראייה והעיניים (ARVO) לשימוש בבעלי חיים בחקר העיניים והראייה24, כל ניתוחי הישרדות העין יכולים להתבצע רק בעין אחת. ראה טבלת חומרים

Representative Results

בהתבסס על התוצאות מהשיטה הכירורגית הזו, מעבדת דאנקן השתמשה במודל העכבר הזה של ניתוח קטרקט כדי לבנות מסלול זמן תגובה לפציעה של תאי אפיתל בעדשה לאחר ניתוח (איור 5). עד 6 שעות לאחר הניתוח, 5% מתעתוק אפיתל העדשה מתבטא באופן דיפרנציאלי (איור 6A), כו?.......

Discussion

טכניקה כירורגית זו דורשת טיפול מתקדם בעכבר ומיומנויות מיקרו-כירורגיות הדורשות תרגול כדי לפתח. הקשה ביותר לשלוט הוא המיקום של תפרים עדינים בקרנית כדי לסגור את הפצע. נניח שהנסיין הוא טירון מוחלט לתפירה. במקרה זה, מומלץ לתרגל תחילה שימוש בחוט ובד, ולאחר מכן לעבור לתרגל באמצ.......

Disclosures

מעבדת דאנקן קיבלה תמיכה כספית מפליאנטקס כדי לבחון טיפולים נגד PCO באמצעות מודל ניתוח זה.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לעיניים (EY015279 ו-EY028597) ו-Delaware INBRE (P20 GM103446).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.5% Erythryomycin opthalmic ointment USPBaush Lomb24208-910-55
1% Atropine sulfate ophthalmic solutionAmneal60219-1748-2
1% Tropicamide opthalmic solution USPAkorn17478-102-12
10-0 Nylon sutureEthicon7707G
2.5% Phenylephrine hydrochloride ophtahlmic solution USPAkorn17478-200-12
26 G 1/2 Needles - straightBD PrecisionGlide5111
27 G 45° bent dispensing tip 1"Harfington
Balanced saline solutionPhoenix57319-555-06
Bupranorphine (0.1 mg/kg)APP Pharmaceticals401730D
Chlorhexidine solution
Needle holder 2-110Duckworth & Kent2-110-3E
Noyes scissors, straightFine Science Tools12060-02
SMZ800 Nikon model microscopeNikon
Sterile disposable scalpel No.11Feather2975#11
Tweezers #5 DumontElectron Microscopy Sciences72700-D
Xylazine/Ketamine/Acepromazine (35 mg/kg, 80 mg/kg, 0.5 mg/kg) solutionAPP Pharmaceticals401730D

References

  1. Wormstone, I. M., Wormstone, Y. M., Smith, A. J. O., Eldred, J. A. Posterior capsule opacification: What's in the bag. Prog Retin Eye Res. 82, 100905 (2021).
  2. Bassnett, S., Shi, Y., Vrensen, G. F. Biological glass: structural determinan....

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved