A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
שיטה זו מדגימה ניתוח קטרקט in vivo על ידי הסרת תאי סיבי עדשה מעכברים בוגרים והשארת שקית הקופסית עם תאי אפיתל מחוברים לעדשה (LECs). תגובת הפציעה מוערכת בזמנים שונים לאחר הניתוח באמצעות קריטריונים מולקולריים ומורפולוגיים.
ניתוח קטרקט (CS) הוא טיפול יעיל לקטרקט, גורם עיקרי לנכות ראייה ברחבי העולם. עם זאת, ניתוח קיסרי מוביל לדלקת עיניים, ובטווח הארוך, הוא עלול לגרום לפסיפיקציה של הקופסיפיקציה האחורית (PCO) ו / או פריקת עדשה המונעת על ידי צמיחת יתר לאחר ניתוח של תאי אפיתל עדשה (LEC) והפיכתם למיופיברובלסטים ו / או תאי סיבים חריגים. עם זאת, המנגנונים המולקולריים שבאמצעותם CS גורם לדלקת ול- PCO עדיין מעורפלים מכיוון שרוב המודלים במבחנה אינם משחזרים את תגובת ריפוי הפצע של LECs הנראים in vivo, בעוד שמודלים מסורתיים של בעלי חיים של ניתוחי קטרקט, כגון ארנבות, אינם מאפשרים מניפולציה גנטית של ביטוי גנים כדי לבדוק מנגנונים. לאחרונה, המעבדה שלנו ואחרים השתמשו בהצלחה בעכברים מהונדסים גנטית כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים המניעים את השראת האיתות הפרו-דלקתי ואפיתל LEC למעבר מזנכימלי, מה שמוביל לתובנה חדשה לגבי פתוגנזה של PCO. כאן, אנו מדווחים על הפרוטוקול שנקבע למידול ניתוחי קטרקט בעכברים, המאפשר פרופיל שעתוק חזק של תגובת LECs להסרת תאי סיבי עדשה באמצעות RNAseq, הערכת ביטוי חלבונים על ידי אימונופלואורסנציה כמותית למחצה, ושימוש בכלים גנטיים מודרניים של עכברים כדי לבחון את תפקודם של גנים המשערים להשתתף בפתוגנזה של דלקת חריפה כמו sequelae, כמו גם המרה מאוחרת יותר של LECs למיופיברובלסטים ו/או תאי סיבי עדשה חריגים.
העדשה היא רקמה מאורגנת ושקופה מאוד השוברת אור כדי לייצר תמונה ממוקדת בבירור על הרשתית 1,2,3. איבר מיוחד זה מוקף בקרום מרתף רצוף (הקפסולה), המבודד את העדשה מחלקים אחרים של העין. המשטח הקדמי הפנימי של הקפסולה מעגן שכבה אחת של תאי אפיתל עדשה (LECs), אשר לאחר מכן מתמיינים בקו המשווה של העדשה לתאי סיבי עדשה, המהווים את הרוב המכריע של עדשה3. קטרקט מתרחש כאשר העדשה מאבדת את שקיפותה עקב גורמים כמו הזדקנות, מוטציה גנטית, קרינת UV, לחץ חמצוני וטראומה עינית4. קטרקט הוא גורם מוביל לעיוורון ברחבי העולם, במיו....
הפרוטוקול הבא אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת דלאוור תחת פרוטוקול #1039-2021-1. בהתאם לאגודה לחקר הראייה והעיניים (ARVO) לשימוש בבעלי חיים בחקר העיניים והראייה24, כל ניתוחי הישרדות העין יכולים להתבצע רק בעין אחת. ראה טבלת חומרים
בהתבסס על התוצאות מהשיטה הכירורגית הזו, מעבדת דאנקן השתמשה במודל העכבר הזה של ניתוח קטרקט כדי לבנות מסלול זמן תגובה לפציעה של תאי אפיתל בעדשה לאחר ניתוח (איור 5). עד 6 שעות לאחר הניתוח, 5% מתעתוק אפיתל העדשה מתבטא באופן דיפרנציאלי (איור 6A), כו?.......
טכניקה כירורגית זו דורשת טיפול מתקדם בעכבר ומיומנויות מיקרו-כירורגיות הדורשות תרגול כדי לפתח. הקשה ביותר לשלוט הוא המיקום של תפרים עדינים בקרנית כדי לסגור את הפצע. נניח שהנסיין הוא טירון מוחלט לתפירה. במקרה זה, מומלץ לתרגל תחילה שימוש בחוט ובד, ולאחר מכן לעבור לתרגל באמצ.......
עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לעיניים (EY015279 ו-EY028597) ו-Delaware INBRE (P20 GM103446).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.5% Erythryomycin opthalmic ointment USP | Baush Lomb | 24208-910-55 | |
1% Atropine sulfate ophthalmic solution | Amneal | 60219-1748-2 | |
1% Tropicamide opthalmic solution USP | Akorn | 17478-102-12 | |
10-0 Nylon suture | Ethicon | 7707G | |
2.5% Phenylephrine hydrochloride ophtahlmic solution USP | Akorn | 17478-200-12 | |
26 G 1/2 Needles - straight | BD PrecisionGlide | 5111 | |
27 G 45° bent dispensing tip 1" | Harfington | ||
Balanced saline solution | Phoenix | 57319-555-06 | |
Bupranorphine (0.1 mg/kg) | APP Pharmaceticals | 401730D | |
Chlorhexidine solution | |||
Needle holder 2-110 | Duckworth & Kent | 2-110-3E | |
Noyes scissors, straight | Fine Science Tools | 12060-02 | |
SMZ800 Nikon model microscope | Nikon | ||
Sterile disposable scalpel No.11 | Feather | 2975#11 | |
Tweezers #5 Dumont | Electron Microscopy Sciences | 72700-D | |
Xylazine/Ketamine/Acepromazine (35 mg/kg, 80 mg/kg, 0.5 mg/kg) solution | APP Pharmaceticals | 401730D |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved