דוגמנות ניתוח קטרקט בעכברים

Summary

שיטה זו מדגימה ניתוח קטרקט in vivo על ידי הסרת תאי סיבי עדשה מעכברים בוגרים והשארת שקית הקופסית עם תאי אפיתל מחוברים לעדשה (LECs). תגובת הפציעה מוערכת בזמנים שונים לאחר הניתוח באמצעות קריטריונים מולקולריים ומורפולוגיים.

Abstract

ניתוח קטרקט (CS) הוא טיפול יעיל לקטרקט, גורם עיקרי לנכות ראייה ברחבי העולם. עם זאת, ניתוח קיסרי מוביל לדלקת עיניים, ובטווח הארוך, הוא עלול לגרום לפסיפיקציה של הקופסיפיקציה האחורית (PCO) ו / או פריקת עדשה המונעת על ידי צמיחת יתר לאחר ניתוח של תאי אפיתל עדשה (LEC) והפיכתם למיופיברובלסטים ו / או תאי סיבים חריגים. עם זאת, המנגנונים המולקולריים שבאמצעותם CS גורם לדלקת ול- PCO עדיין מעורפלים מכיוון שרוב המודלים במבחנה אינם משחזרים את תגובת ריפוי הפצע של LECs הנראים in vivo, בעוד שמודלים מסורתיים של בעלי חיים של ניתוחי קטרקט, כגון ארנבות, אינם מאפשרים מניפולציה גנטית של ביטוי גנים כדי לבדוק מנגנונים. לאחרונה, המעבדה שלנו ואחרים השתמשו בהצלחה בעכברים מהונדסים גנטית כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים המניעים את השראת האיתות הפרו-דלקתי ואפיתל LEC למעבר מזנכימלי, מה שמוביל לתובנה חדשה לגבי פתוגנזה של PCO. כאן, אנו מדווחים על הפרוטוקול שנקבע למידול ניתוחי קטרקט בעכברים, המאפשר פרופיל שעתוק חזק של תגובת LECs להסרת תאי סיבי עדשה באמצעות RNAseq, הערכת ביטוי חלבונים על ידי אימונופלואורסנציה כמותית למחצה, ושימוש בכלים גנטיים מודרניים של עכברים כדי לבחון את תפקודם של גנים המשערים להשתתף בפתוגנזה של דלקת חריפה כמו sequelae, כמו גם המרה מאוחרת יותר של LECs למיופיברובלסטים ו/או תאי סיבי עדשה חריגים.

Introduction

העדשה היא רקמה מאורגנת ושקופה מאוד השוברת אור כדי לייצר תמונה ממוקדת בבירור על הרשתית ^1,2,3. איבר מיוחד זה מוקף בקרום מרתף רצוף (הקפסולה), המבודד את העדשה מחלקים אחרים של העין. המשטח הקדמי הפנימי של הקפסולה מעגן שכבה אחת של תאי אפיתל עדשה (LECs), אשר לאחר מכן מתמיינים בקו המשווה של העדשה לתאי סיבי עדשה, המהווים את הרוב המכריע של עדשה³. קטרקט מתרחש כאשר העדשה מאבדת את שקיפותה עקב גורמים כמו הזדקנות, מוטציה גנטית, קרינת UV, לחץ חמצוני וטראומה עינית⁴. קטרקט הוא גורם מוביל לעיוורון ברחבי העולם, במיו....

Protocol

הפרוטוקול הבא אושר על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים באוניברסיטת דלאוור תחת פרוטוקול #1039-2021-1. בהתאם לאגודה לחקר הראייה והעיניים (ARVO) לשימוש בבעלי חיים בחקר העיניים והראייה²⁴, כל ניתוחי הישרדות העין יכולים להתבצע רק בעין אחת. ראה טבלת חומרים

Discussion

טכניקה כירורגית זו דורשת טיפול מתקדם בעכבר ומיומנויות מיקרו-כירורגיות הדורשות תרגול כדי לפתח. הקשה ביותר לשלוט הוא המיקום של תפרים עדינים בקרנית כדי לסגור את הפצע. נניח שהנסיין הוא טירון מוחלט לתפירה. במקרה זה, מומלץ לתרגל תחילה שימוש בחוט ובד, ולאחר מכן לעבור לתרגל באמצ.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.5% Erythryomycin opthalmic ointment USP	Baush Lomb	24208-910-55
1% Atropine sulfate ophthalmic solution	Amneal	60219-1748-2
1% Tropicamide opthalmic solution USP	Akorn	17478-102-12
10-0 Nylon suture	Ethicon	7707G
2.5% Phenylephrine hydrochloride ophtahlmic solution USP	Akorn	17478-200-12
26 G 1/2 Needles - straight	BD PrecisionGlide	5111
27 G 45° bent dispensing tip 1"	Harfington
Balanced saline solution	Phoenix	57319-555-06
Bupranorphine (0.1 mg/kg)	APP Pharmaceticals	401730D
Chlorhexidine solution
Needle holder 2-110	Duckworth & Kent	2-110-3E
Noyes scissors, straight	Fine Science Tools	12060-02
SMZ800 Nikon model microscope	Nikon
Sterile disposable scalpel No.11	Feather	2975#11
Tweezers #5 Dumont	Electron Microscopy Sciences	72700-D
Xylazine/Ketamine/Acepromazine (35 mg/kg, 80 mg/kg, 0.5 mg/kg) solution	APP Pharmaceticals	401730D