Регулирование роста шванновских клеток с помощью наносекундного импульсного электрического поля для регенерации периферических нервов in vitro

Summary

В данной статье мы представляем протокол применения наносекундного импульсного электрического поля (nsPEF) для стимуляции шванновских клеток in vitro. Способность к синтезу и секреции соответствующих факторов и изменения в поведении клеток подтвердили успешную стимуляцию с использованием nsPEF. Исследование дает положительное представление о методе регенерации периферических нервов.

Abstract

Шванновские клетки (СК) являются миелинизирующими клетками периферической нервной системы, играющими решающую роль в регенерации периферических нервов. Наносекундное импульсное электрическое поле (nsPEF) — это новый метод, применимый в электростимуляции нервов, который продемонстрировал свою эффективность в стимулировании пролиферации клеток и других биологических процессов. С целью оценки того, претерпевают ли СК значимые изменения при нПЭФ и помогают изучить потенциал новых методов регенерации периферических нервов, культивируемые клетки RSC96 подвергали стимуляции нПЭФ при 5 кВ и 10 кВ с последующим продолжением культивирования в течение 3-4 дней. Впоследствии были оценены некоторые релевантные факторы, экспрессируемые СК, чтобы продемонстрировать успешную стимуляцию, включая специфический маркерный белок, нейротрофический фактор, фактор транскрипции и регулятор миелинизации. Репрезентативные результаты показали, что nsPEF значительно усиливает пролиферацию и миграцию СК и способность синтезировать соответствующие факторы, которые положительно влияют на регенерацию периферических нервов. В то же время, более низкая экспрессия GFAP указывала на благоприятный прогноз повреждения периферических нервов. Все эти результаты показывают, что нПСЭФ обладает большим потенциалом в качестве эффективного метода лечения повреждений периферических нервов путем стимуляции СК.

Introduction

Каждый год миллионы людей страдают от повреждения нервов, затрагивающих как периферическую нервную систему (ПНС), так и центральную нервную систему (ЦНС)¹. Исследования показали, что аксональная восстановительная способность ЦНС после повреждения нерва достаточно ограничена, в то время как ПНС демонстрирует повышенную способность благодаря значительной пластичности СК². Тем не менее, достижение полной регенерации после травм периферических нервов остается трудной задачей и продолжает представлять серьезную проблему для здоровья человека ^3,4. В настоящее время аут....

Protocol

1. Размораживание криоконсервированных клеток RSC96

1. Разморозьте криовиал, содержащий 1 мл клеточной суспензии, быстро встряхнув его на водяной бане при температуре 37 °С, а затем добавьте его в центрифужную пробирку, содержащую 4-6 мл готовой питательной среды, и хорошо переме.......

Discussion

Согласно сообщениям, в последние годы наблюдается быстрый рост применения nsPEF. nsPEF оказывает высоконаправленное воздействие только на желаемую область, обеспечивая достаточное количество энергии для лечения, не вызывая дополнительных термических повреждений, что делает его более без.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Antifade mounting medium	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G1401
Anti-GFAP Mouse mAb	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	GB12100-100
Anti-Neurofilament heavy polypeptide Mouse mAb	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	GB12144-100
Anti-S100 beta Mouse mAb	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	GB14146-100
BSA	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	GC305010
Coverslip	Jiangsu Shitai experimental equipment Co., LTD	10212432C
CY3-labeled goat anti-mouse IgG	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	GB21302
DAPI Staining Reagent	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G1012
Decolorizing shaker	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	DS-2S100
High Voltage Power Supply for nsPEF	Matsusada Precision Inc.	AU-60P1.6-L
Histochemical pen	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G6100
Membrane breaking liquid	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G1204
Microscope slide	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G6012
Palm centrifuge	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	MS6000
PBS powdered	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	G0002
Pipette	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD
Positive fluorescence microscope	Nikon, Japan	NIKON ECLIPSE C1
Rabbit Anti-SOX10/AF488 Conjugated antibody	Beijing Bioss Biotechnology Co., LTD	BS-20563R-AF488
RSC96 Schwann cells	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	STCC30007G-1
scanister	3DHISTECH	Pannoramic MIDI
Special cable for nsPEF	Times Microwave Systems	M17/78-RG217
Turbine mixer	Wuhan Xavier Biotechnology Co., LTD	MV-100