Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

В данной статье мы представляем протокол применения наносекундного импульсного электрического поля (nsPEF) для стимуляции шванновских клеток in vitro. Способность к синтезу и секреции соответствующих факторов и изменения в поведении клеток подтвердили успешную стимуляцию с использованием nsPEF. Исследование дает положительное представление о методе регенерации периферических нервов.

Abstract

Шванновские клетки (СК) являются миелинизирующими клетками периферической нервной системы, играющими решающую роль в регенерации периферических нервов. Наносекундное импульсное электрическое поле (nsPEF) — это новый метод, применимый в электростимуляции нервов, который продемонстрировал свою эффективность в стимулировании пролиферации клеток и других биологических процессов. С целью оценки того, претерпевают ли СК значимые изменения при нПЭФ и помогают изучить потенциал новых методов регенерации периферических нервов, культивируемые клетки RSC96 подвергали стимуляции нПЭФ при 5 кВ и 10 кВ с последующим продолжением культивирования в течение 3-4 дней. Впоследствии были оценены некоторые релевантные факторы, экспрессируемые СК, чтобы продемонстрировать успешную стимуляцию, включая специфический маркерный белок, нейротрофический фактор, фактор транскрипции и регулятор миелинизации. Репрезентативные результаты показали, что nsPEF значительно усиливает пролиферацию и миграцию СК и способность синтезировать соответствующие факторы, которые положительно влияют на регенерацию периферических нервов. В то же время, более низкая экспрессия GFAP указывала на благоприятный прогноз повреждения периферических нервов. Все эти результаты показывают, что нПСЭФ обладает большим потенциалом в качестве эффективного метода лечения повреждений периферических нервов путем стимуляции СК.

Introduction

Каждый год миллионы людей страдают от повреждения нервов, затрагивающих как периферическую нервную систему (ПНС), так и центральную нервную систему (ЦНС)1. Исследования показали, что аксональная восстановительная способность ЦНС после повреждения нерва достаточно ограничена, в то время как ПНС демонстрирует повышенную способность благодаря значительной пластичности СК2. Тем не менее, достижение полной регенерации после травм периферических нервов остается трудной задачей и продолжает представлять серьезную проблему для здоровья человека 3,4. В настоящее время аут....

Protocol

1. Размораживание криоконсервированных клеток RSC96

  1. Разморозьте криовиал, содержащий 1 мл клеточной суспензии, быстро встряхнув его на водяной бане при температуре 37 °С, а затем добавьте его в центрифужную пробирку, содержащую 4-6 мл готовой питательной среды, и хорошо переме.......

Representative Results

Импульсные электрические поля низкой интенсивности стимулируют пролиферацию клеток
По данным анализа CCK-8, скорость пролиферации RSC96 в группе 5 кВ/см была значительно выше, чем в клетках контрольной группы. Однако по мере увеличения параметров (20 кВ/см и 40 кВ/см) скорость проли?.......

Discussion

Согласно сообщениям, в последние годы наблюдается быстрый рост применения nsPEF. nsPEF оказывает высоконаправленное воздействие только на желаемую область, обеспечивая достаточное количество энергии для лечения, не вызывая дополнительных термических повреждений, что делает его более без.......

Disclosures

Авторам нечего раскрывать.

Acknowledgements

Эта работа финансировалась в рамках Национального проекта по разработке ключевых научных приборов и оборудования (NO.82027803).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Antifade mounting mediumWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG1401
Anti-GFAP Mouse mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB12100-100
Anti-Neurofilament heavy polypeptide Mouse mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB12144-100
Anti-S100 beta Mouse mAbWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB14146-100
BSAWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGC305010
CoverslipJiangsu Shitai experimental equipment Co., LTD10212432C
CY3-labeled goat anti-mouse IgGWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDGB21302
DAPI Staining ReagentWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG1012
Decolorizing shakerWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDDS-2S100
High Voltage Power Supply for nsPEFMatsusada Precision Inc.AU-60P1.6-L
Histochemical penWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG6100
Membrane breaking liquidWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG1204
Microscope slideWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG6012
Palm centrifugeWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDMS6000
PBS powderedWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDG0002
PipetteWuhan Xavier Biotechnology Co., LTD
Positive fluorescence microscopeNikon, JapanNIKON ECLIPSE C1
Rabbit Anti-SOX10/AF488 Conjugated antibodyBeijing Bioss Biotechnology Co., LTDBS-20563R-AF488
RSC96 Schwann cellsWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDSTCC30007G-1
scanister3DHISTECHPannoramic MIDI
Special cable for nsPEFTimes Microwave SystemsM17/78-RG217
Turbine mixerWuhan Xavier Biotechnology Co., LTDMV-100

References

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

NsPEFGFAP

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved