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In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Abstract

O AVC isquêmico continua sendo a causa predominante de mortalidade e comprometimento funcional entre as populações adultas em todo o mundo. Apenas uma minoria dos pacientes com AVC isquêmico é elegível para receber trombólise intravascular ou terapia de trombectomia mecânica dentro da janela de tempo ideal. Entre os sobreviventes de AVC, cerca de dois terços sofrem disfunções neurológicas por um período prolongado. O estabelecimento de um modelo experimental de AVC isquêmico estável e repetível é extremamente significativo para investigar ainda mais os mecanismos fisiopatológicos e desenvolver estratégias terapêuticas eficazes para o AVC isquêmico. A artéria cerebral média (ACM) representa a localização predominante do AVC isquêmico em humanos, com a oclusão da ACM servindo como o modelo frequentemente empregado de isquemia cerebral focal. Neste protocolo, descrevemos a metodologia de estabelecimento do modelo de oclusão distal da ACM (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6. Como o local de oclusão está localizado no ramo cortical da ACM, esse modelo gera uma lesão infartada moderada restrita ao córtex. A caracterização neurológica, comportamental e histopatológica demonstrou disfunção motora visível, degeneração neuronal e ativação pronunciada de microglia e astrócitos neste modelo. Assim, este modelo de camundongo dMCAO fornece uma ferramenta valiosa para investigar o acidente vascular cerebral de isquemia e vale a pena popularização.

Introduction

O acidente vascular cerebral é uma doença cerebrovascular aguda comum, caracterizada por altas incidências de incapacidade efatalidade1. De todos os casos de AVC, quase 80% pertencem ao AVC isquêmico2. Até agora, a trombólise intravenosa continua sendo uma de um número limitado de abordagens produtivas para o tratamento do AVC isquêmico agudo. No entanto, a eficácia do tratamento trombolítico é restrita pela estreita janela de tempo efetiva e pela ocorrência de transformação hemorrágica3. Na fase de reabilitação a longo prazo após um acidente vascular cerebral isquêmico, um número considerável de ....

Protocol

O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Jianghan e foi conduzido de acordo com as Diretrizes Éticas de Animais Experimentais emitidas pelo Centro de Controle de Doenças da China. Camundongos C57BL/6J machos adultos, com 10 semanas de idade, pesando 24-26 g, foram utilizados neste protocolo. Todos os camundongos foram alojados em um ambiente controlado de ciclo claro/escuro de 12 horas com comida e água ad libitum.

Representative Results

Os principais instrumentos utilizados para realizar o dMCAO são o conjunto de instrumentos microcirúrgicos, o vaporizador de isoflurano e o gerador de eletrocoagulação microcirúrgica monopolar mostrado na Figura 1. O procedimento experimental deste estudo está ilustrado na Figura 2. Em resumo, uma pequena craniotomia de janela óssea foi empregada para expor a ACM distal, que foi posteriormente coagulada para induzir isquemia cerebral focal permanente em .......

Discussion

No presente protocolo do modelo dMCAO de eletrocoagulação de craniotomia, os procedimentos cirúrgicos são conduzidos com o mínimo de invasividade, em que apenas uma porção do músculo temporal é separada para mitigar os efeitos adversos na função mastigatória. Todos os camundongos se recuperaram bem após o procedimento, sem casos observados de dificuldades de alimentação. A ACM pode ser facilmente discernida no osso temporal do camundongo, facilitando assim a identificação precisa dos locais adequados da .......

Acknowledgements

Este estudo foi apoiado pelas doações da Nature Science Foundation da província de Hubei (2022CFC057).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
2,3,5-Triphenyltetrazolium
Chloride (TTC)
Sigma-Aldrich108380Dye for TTC staining
24-well culture plateCorning (USA)CLS3527Vessel for TTC staining
4% paraformaldehydeWuhan Servicebio Technology
Co., Ltd.
G1101Tissue fixation
5% bovine serum albuminWuhan BOSTER Bio Co., Ltd.AR004Non-specific antigen blocking
5-0 Polyglycolic acid sutureJinhuan Medical Co., LtdKCR531Material for surgery
Anesthesia machineMidmark CorporationVMRAnesthetized animal
Antifade mounting mediumBeyotime BiotechP0131Seal for IF staining
Automation-tissue-dehydrating 
machine
Leica Biosystems (Germany)TP1020Dehydrate tissue
Depilatory creamVeet (France)20220328Material for surgery
Diclofenac sodium gelWuhan Ma Yinglong Pharmaceutical
 Co., Ltd.
H10950214Analgesia for animal
Drill tip (0.8 mm)Rwd Life Science Co., Ltd.Equipment for surgery
Eosin staining solutionWuhan Servicebio Technology
Co., Ltd.
G1001Dye for H&E staining
Eye ointmentGuangzhou Pharmaceutical Co., LtdH44023098Material for surgery
Fluorescence microscopeOlympus (Japan)BX51Image acquisition
GFAP Mouse monoclonal antibodyCell Signaling Technology Inc.
(Danvers, MA, USA)
3670Primary antibody for IF staining
Goat anti-mouse Alexa
488-conjugated IgG
Cell Signaling Technology Inc.
(Danvers, MA, USA)
4408Second antibody for IF staining
Goat anti-rabbit Alexa
594-conjugated IgG
Cell Signaling Technology Inc.
(Danvers, MA, USA)
8889Second antibody for IF staining
Grip strength meterShanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd.XR501Equipment for behavioral test
Hematoxylin staining solutionWuhan Servicebio Technology
Co., Ltd.
G1004Dye for H&E staining
Iba1 Rabbit monoclonal antibodyAbcamab178846Primary antibody for IF staining
IsofluraneRwd Life Science Co., Ltd.R510-22-10Anesthetized animal
Laser doppler blood flow meterMoor Instruments (UK)moorVMSBlood flow monitoring
MeloxicamBoehringer-IngelheimJ20160020Analgesia for animal
MicrodrillRwd Life Science Co., Ltd.78001Equipment for surgery
Microsurgical instruments setRwd Life Science Co., Ltd.SP0009-REquipment for surgery
MicrotomeThermo Fisher Scientific (USA)HM325Tissue section production
Microtome bladeLeica Biosystems (Germany)819Tissue section production
Monopolar electrocoagulation generatorSpring Scenery Medical Instrument
Co., Ltd.
CZ0001Equipment for surgery
Mupirocin ointmentTianjin Smith Kline & French
Laboratories Ltd.
H10930064Anti-infection for animal
NeuN Rabbit monoclonal antibodyCell Signaling Technology Inc.
(Danvers, MA, USA)
24307Primary antibody for IF staining
Neutral balsamAbsin Bioscienceabs9177Seal for H&E staining
Paraffin embedding centerThermo Fisher Scientific (USA)EC 350Produce paraffin blocks
Pentobarbital sodiumSigma-AldrichP3761Euthanized animal
Phosphate buffered salineShanghai Beyotime Biotech Co., LtdC0221ARinsing for tissue section
ShaverShenzhen Codos Electrical Appliances
Co.,Ltd.
CP-9200Equipment for surgery
Sodium citrate solutionShanghai Beyotime Biotech Co., Ltd.P0083Antigen retrieval for IF staining

References

  1. Patel, P., Yavagal, D., Khandelwal, P. Hyperacute management of ischemic strokes: JACC Focus Seminar. J Am Coll Cardiol. 75 (15), 1844-1856 (2020).
  2. GBD 2016 Stroke Collaborators.

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Palavras chave AVC isqu micooclus o da art ria cerebral m diaoclus o distal da art ria cerebral m diacamundongos C57BL 6disfun o neurol gicadegenera o de neur niosativa o da microgliaativa o de astr citos

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