Indução de AVC Isquêmico Agudo em Camundongos Usando a Técnica de Oclusão Distal da Artéria Média

Summary

Aqui, apresentamos um protocolo para estabelecer um modelo de oclusão da artéria cerebral média distal (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6J e avaliar o comportamento neurológico subsequente e as características histopatológicas.

Abstract

O AVC isquêmico continua sendo a causa predominante de mortalidade e comprometimento funcional entre as populações adultas em todo o mundo. Apenas uma minoria dos pacientes com AVC isquêmico é elegível para receber trombólise intravascular ou terapia de trombectomia mecânica dentro da janela de tempo ideal. Entre os sobreviventes de AVC, cerca de dois terços sofrem disfunções neurológicas por um período prolongado. O estabelecimento de um modelo experimental de AVC isquêmico estável e repetível é extremamente significativo para investigar ainda mais os mecanismos fisiopatológicos e desenvolver estratégias terapêuticas eficazes para o AVC isquêmico. A artéria cerebral média (ACM) representa a localização predominante do AVC isquêmico em humanos, com a oclusão da ACM servindo como o modelo frequentemente empregado de isquemia cerebral focal. Neste protocolo, descrevemos a metodologia de estabelecimento do modelo de oclusão distal da ACM (dMCAO) por meio de eletrocoagulação transcraniana em camundongos C57BL/6. Como o local de oclusão está localizado no ramo cortical da ACM, esse modelo gera uma lesão infartada moderada restrita ao córtex. A caracterização neurológica, comportamental e histopatológica demonstrou disfunção motora visível, degeneração neuronal e ativação pronunciada de microglia e astrócitos neste modelo. Assim, este modelo de camundongo dMCAO fornece uma ferramenta valiosa para investigar o acidente vascular cerebral de isquemia e vale a pena popularização.

Introduction

O acidente vascular cerebral é uma doença cerebrovascular aguda comum, caracterizada por altas incidências de incapacidade e^fatalidade1. De todos os casos de AVC, quase 80% pertencem ao AVC isquêmico². Até agora, a trombólise intravenosa continua sendo uma de um número limitado de abordagens produtivas para o tratamento do AVC isquêmico agudo. No entanto, a eficácia do tratamento trombolítico é restrita pela estreita janela de tempo efetiva e pela ocorrência de transformação hemorrágica³. Na fase de reabilitação a longo prazo após um acidente vascular cerebral isquêmico, um número considerável de ....

Protocol

O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Jianghan e foi conduzido de acordo com as Diretrizes Éticas de Animais Experimentais emitidas pelo Centro de Controle de Doenças da China. Camundongos C57BL/6J machos adultos, com 10 semanas de idade, pesando 24-26 g, foram utilizados neste protocolo. Todos os camundongos foram alojados em um ambiente controlado de ciclo claro/escuro de 12 horas com comida e água ad libitum.

Discussion

No presente protocolo do modelo dMCAO de eletrocoagulação de craniotomia, os procedimentos cirúrgicos são conduzidos com o mínimo de invasividade, em que apenas uma porção do músculo temporal é separada para mitigar os efeitos adversos na função mastigatória. Todos os camundongos se recuperaram bem após o procedimento, sem casos observados de dificuldades de alimentação. A ACM pode ser facilmente discernida no osso temporal do camundongo, facilitando assim a identificação precisa dos locais adequados da .......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,3,5-Triphenyltetrazolium Chloride (TTC)	Sigma-Aldrich	108380	Dye for TTC staining
24-well culture plate	Corning (USA)	CLS3527	Vessel for TTC staining
4% paraformaldehyde	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1101	Tissue fixation
5% bovine serum albumin	Wuhan BOSTER Bio Co., Ltd.	AR004	Non-specific antigen blocking
5-0 Polyglycolic acid suture	Jinhuan Medical Co., Ltd	KCR531	Material for surgery
Anesthesia machine	Midmark Corporation	VMR	Anesthetized animal
Antifade mounting medium	Beyotime Biotech	P0131	Seal for IF staining
Automation-tissue-dehydrating  machine	Leica Biosystems (Germany)	TP1020	Dehydrate tissue
Depilatory cream	Veet (France)	20220328	Material for surgery
Diclofenac sodium gel	Wuhan Ma Yinglong Pharmaceutical  Co., Ltd.	H10950214	Analgesia for animal
Drill tip (0.8 mm)	Rwd Life Science Co., Ltd.		Equipment for surgery
Eosin staining solution	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1001	Dye for H&E staining
Eye ointment	Guangzhou Pharmaceutical Co., Ltd	H44023098	Material for surgery
Fluorescence microscope	Olympus (Japan)	BX51	Image acquisition
GFAP Mouse monoclonal antibody	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	3670	Primary antibody for IF staining
Goat anti-mouse Alexa 488-conjugated IgG	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	4408	Second antibody for IF staining
Goat anti-rabbit Alexa 594-conjugated IgG	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	8889	Second antibody for IF staining
Grip strength meter	Shanghai Xinruan Information Technology Co., Ltd.	XR501	Equipment for behavioral test
Hematoxylin staining solution	Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.	G1004	Dye for H&E staining
Iba1 Rabbit monoclonal antibody	Abcam	ab178846	Primary antibody for IF staining
Isoflurane	Rwd Life Science Co., Ltd.	R510-22-10	Anesthetized animal
Laser doppler blood flow meter	Moor Instruments (UK)	moorVMS	Blood flow monitoring
Meloxicam	Boehringer-Ingelheim	J20160020	Analgesia for animal
Microdrill	Rwd Life Science Co., Ltd.	78001	Equipment for surgery
Microsurgical instruments set	Rwd Life Science Co., Ltd.	SP0009-R	Equipment for surgery
Microtome	Thermo Fisher Scientific (USA)	HM325	Tissue section production
Microtome blade	Leica Biosystems (Germany)	819	Tissue section production
Monopolar electrocoagulation generator	Spring Scenery Medical Instrument Co., Ltd.	CZ0001	Equipment for surgery
Mupirocin ointment	Tianjin Smith Kline & French Laboratories Ltd.	H10930064	Anti-infection for animal
NeuN Rabbit monoclonal antibody	Cell Signaling Technology Inc. (Danvers, MA, USA)	24307	Primary antibody for IF staining
Neutral balsam	Absin Bioscience	abs9177	Seal for H&E staining
Paraffin embedding center	Thermo Fisher Scientific (USA)	EC 350	Produce paraffin blocks
Pentobarbital sodium	Sigma-Aldrich	P3761	Euthanized animal
Phosphate buffered saline	Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd	C0221A	Rinsing for tissue section
Shaver	Shenzhen Codos Electrical Appliances Co.,Ltd.	CP-9200	Equipment for surgery
Sodium citrate solution	Shanghai Beyotime Biotech Co., Ltd.	P0083	Antigen retrieval for IF staining