Imunohistoquímica Fluorescente Cíclica Multiplex

O microambiente tumoral envolve interações entre células hospedeiras, células tumorais, células imunes, células estromais e vasculatura. Caracterizar e organizar espacialmente subgrupos de células imunes e proteínas-alvo são cruciais para fins prognósticos e terapêuticos. Isso levou ao desenvolvimento de métodos de coloração imunoistoquímica multiplexada. A imunohistoquímica por fluorescência multiplex permite a detecção simultânea de múltiplos marcadores, facilitando uma compreensão abrangente da função celular e das interações intercelulares. Neste trabalho, descrevemos um fluxo de trabalho para o ensaio de imunohistoquímica fluorescente cíclica multiplex e sua aplicação na análise de quantificação de subgrupos de linfócitos. A coloração por imunoistoquímica fluorescente cíclica multiplex segue etapas e reagentes semelhantes aos da imunohistoquímica padrão, envolvendo recuperação de antígenos, incubação cíclica de anticorpos e coloração em lâmina de tecido fixada em formalina e emblocada em parafina (FFPE). Durante a reação antígeno-anticorpo, uma mistura de anticorpos de diferentes espécies é preparada. Condições, como tempo de recuperação de antígenos e concentração de anticorpos, são otimizadas e validadas para aumentar a relação sinal-ruído. Esta técnica é reprodutível e serve como uma ferramenta valiosa para pesquisas em imunoterapia e aplicações clínicas.