Inmunohistoquímica fluorescente cíclica multiplex

El microambiente tumoral implica interacciones entre las células huésped, las células tumorales, las células inmunitarias, las células estromales y la vasculatura. La caracterización y organización espacial de los subconjuntos de células inmunitarias y las proteínas diana son cruciales para fines pronósticos y terapéuticos. Esto ha llevado al desarrollo de métodos de tinción inmunohistoquímica multiplexada. La inmunohistoquímica de fluorescencia múltiple permite la detección simultánea de múltiples marcadores, lo que facilita una comprensión integral de la función celular y las interacciones intercelulares. En este artículo, describimos un flujo de trabajo para el ensayo de inmunohistoquímica fluorescente cíclico múltiple y su aplicación en el análisis de cuantificación de subconjuntos de linfocitos. La tinción inmunohistoquímica fluorescente cíclica múltiple sigue pasos y reactivos similares a los de la inmunohistoquímica estándar, que incluye la recuperación de antígenos, la incubación cíclica de anticuerpos y la tinción en un portaobjetos de tejido fijado en formol e incluido en parafina (FFPE). Durante la reacción antígeno-anticuerpo, se prepara una mezcla de anticuerpos de diferentes especies. Las condiciones, como el tiempo de recuperación de antígenos y la concentración de anticuerpos, se optimizan y validan para aumentar la relación señal-ruido. Esta técnica es reproducible y sirve como una herramienta valiosa para la investigación de inmunoterapia y aplicaciones clínicas.