Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Фибробласты, выделенные из сердца взрослого человека, культивировали для слияния на посудах, покрытых желатином, для получения специфичного для миокарда внеклеточного матрикса. После децеллюляризации этот субстрат может быть использован для культивирования и изучения других сердечных клеток и клеточно-матриксных взаимодействий.

Abstract

Миокард состоит из кардиомиоцитов и еще большего количества фибробластов, последние отвечают за продукцию внеклеточного матрикса. С ранних стадий развития сердца на протяжении всей жизни, как в норме, так и при патологии, состав внеклеточного матрикса изменяется и влияет на структуру и функцию миокарда. Целью описанного здесь метода является получение субстрата для культивирования сердечных клеток in vitro (называемого сердечной ВКМ), имитирующего внеклеточный матрикс миокарда in vivo. С этой целью фибробласты, выделенные из сердца взрослого человека, культивировали до слияния на посудах, покрытых желатином, для получения специфичного для миокарда внеклеточного матрикса. Последующее удаление сердечных фибробластов с сохранением отложенной сердечной ВКМ позволило получить субстрат для изучения влияния миокард-специфичного внеклеточного матрикса на другие клетки. Важно отметить, что состав фибробластного покрытия чашки для культуры изменяется в зависимости от активности in vivo фибробластов, выделенных из сердца, что позволяет впоследствии изучать клеточно-матриксные взаимодействия в различных нормальных и патологических условиях.

Introduction

Все клетки расположены in vivo в специализированной микросреде, в которой они могут выживать и выполнять свои специфические функции. В любой ткани клетки окружены внеклеточным матриксом, состоящим из фибриллярных и нефибриллярных белков, а также основных веществ, богатых гликозаминогликанами. Качественные и количественные изменения в составе матрицы влияют на клеточную биологию, контролируя такие процессы, как пролиферация клеток, апоптоз, миграция или дифференцировка. Следовательно, усилия направлены на воссоздание этого микроокружения для исследований in vitro клеток из различных тканей

Protocol

Сердечные ткани были получены от пациентов с терминальной стадией сердечной недостаточности из-за ишемической кардиопатии, которым проводилась трансплантация сердца. Все образцы, использованные для экспериментов, были собраны с согласия пациента и без его идентифи.......

Representative Results

Отрастание фибробластов из небольших фрагментов нативного миокарда, помещенных в культуру, наблюдалось в течение 3-5 дней (рис. 1).

В последующие дни количество фибробластов продолжало увеличиваться, возможно, из-за устойчивого роста из о.......

Discussion

Фибробласты, выделенные из образцов сердца человека, культивировали до слияния в течение 21 дня для синтеза и депонирования внеклеточного матрикса, образуя когезивный слой, прочно прилегающий к поверхности культуральной пластины. Последующее удаление сердечных фибр.......

Disclosures

Авторам нечего раскрывать.

Acknowledgements

Никакой.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1 L laboratory bottle VWR215-1595Clean and autoclave before use
10 mL serological pipetFalcon357551Sterile,  polystyrene
100 mm glass plate VWR391-0578Clean and autoclave before use
100 mm platesFalcon351029Treated, sterile cell culture dish
15 mL sterile tubesFalcon352097Centrifuge sterile tubes, polypropylene
22 mm x 22 mm cover glassesVWR631-1570Autoclave before use
25 mL serological pipetFalcon357525Sterile,  polystyrene
250 mL laboratory bottle VWR215-1593Clean and autoclave before use
35 mm platesFalcon353001Treated, sterile cell culture dish
5 mL serological pipetFalcon357543Sterile, polystyrene
50 mL sterile tubesFalcon352098Centrifuge sterile tubes, polypropylene
500 mL laboratory bottleVWR215-1594Clean and autoclave before use
60 mm platesFalcon353004Treated, sterile cell culture dish
Ammonium hydroxide (NH4OH)Sigma- Aldrich338818Liquid
Disposable scalpelsVWR233-5526Sterile and disposable
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)Sigma- AldrichD6429-500mlStore at 2-8 °C; avoid exposure to light
Fetal Bovine Serum (FBS)Sigma- AldrichF9665-500mlStore at -20 °C. The serum should be aliquoted into smaller working volumes
Fine forcepsVWR232-1317Clean and autoclave before use
Gelatin from porcine skinSigma- AldrichG1890-100GCommercial Powder
Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)Sigma- AldrichH1387-1LPowder
Large surgical scissorsVWR233-1211Clean and autoclave before use
Microdissecting scissors Sigma- AldrichS3146Clean and autoclave before use
Penicillin and Streptomycin Sigma- AldrichP4333-100mlStore at -20°C. The solution  should be aliquoted into smaller working volumes
Potassium ChlorideSigma- AldrichP9333Powder
Potassium Phosphate MonobasicSigma- AldrichP5665Powder
Sodium Chloride Sigma- AldrichS7653Powder
Sodium Phosphate DibasicSigma- Aldrich94046Powder
Stericup FiltersMilliporeS2GPU05RESterile and disposable 0.22 mm filter membranes 
Triton X-100Sigma- Aldrich9002-93-1Liquid
Trypsin-EDTASigma- AldrichT4049-100mlStore at -20 °C. It should be aliquoted into smaller working volumes

References

  1. Gattazzo, F., Urciuolo, A., Bonaldo, P. Extracellular matrix: A dynamic microenvironment for stem cell niche. Biochim Biophys Acta. 1840 (8), 2506-2519 (2014).
  2. Zhang, Y., et al.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved