A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Фибробласты, выделенные из сердца взрослого человека, культивировали для слияния на посудах, покрытых желатином, для получения специфичного для миокарда внеклеточного матрикса. После децеллюляризации этот субстрат может быть использован для культивирования и изучения других сердечных клеток и клеточно-матриксных взаимодействий.
Миокард состоит из кардиомиоцитов и еще большего количества фибробластов, последние отвечают за продукцию внеклеточного матрикса. С ранних стадий развития сердца на протяжении всей жизни, как в норме, так и при патологии, состав внеклеточного матрикса изменяется и влияет на структуру и функцию миокарда. Целью описанного здесь метода является получение субстрата для культивирования сердечных клеток in vitro (называемого сердечной ВКМ), имитирующего внеклеточный матрикс миокарда in vivo. С этой целью фибробласты, выделенные из сердца взрослого человека, культивировали до слияния на посудах, покрытых желатином, для получения специфичного для миокарда внеклеточного матрикса. Последующее удаление сердечных фибробластов с сохранением отложенной сердечной ВКМ позволило получить субстрат для изучения влияния миокард-специфичного внеклеточного матрикса на другие клетки. Важно отметить, что состав фибробластного покрытия чашки для культуры изменяется в зависимости от активности in vivo фибробластов, выделенных из сердца, что позволяет впоследствии изучать клеточно-матриксные взаимодействия в различных нормальных и патологических условиях.
Все клетки расположены in vivo в специализированной микросреде, в которой они могут выживать и выполнять свои специфические функции. В любой ткани клетки окружены внеклеточным матриксом, состоящим из фибриллярных и нефибриллярных белков, а также основных веществ, богатых гликозаминогликанами. Качественные и количественные изменения в составе матрицы влияют на клеточную биологию, контролируя такие процессы, как пролиферация клеток, апоптоз, миграция или дифференцировка. Следовательно, усилия направлены на воссоздание этого микроокружения для исследований in vitro клеток из различных тканей
Сердечные ткани были получены от пациентов с терминальной стадией сердечной недостаточности из-за ишемической кардиопатии, которым проводилась трансплантация сердца. Все образцы, использованные для экспериментов, были собраны с согласия пациента и без его идентифи.......
Отрастание фибробластов из небольших фрагментов нативного миокарда, помещенных в культуру, наблюдалось в течение 3-5 дней (рис. 1).
В последующие дни количество фибробластов продолжало увеличиваться, возможно, из-за устойчивого роста из о.......
Фибробласты, выделенные из образцов сердца человека, культивировали до слияния в течение 21 дня для синтеза и депонирования внеклеточного матрикса, образуя когезивный слой, прочно прилегающий к поверхности культуральной пластины. Последующее удаление сердечных фибр.......
Никакой.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1 L laboratory bottle | VWR | 215-1595 | Clean and autoclave before use |
10 mL serological pipet | Falcon | 357551 | Sterile, polystyrene |
100 mm glass plate | VWR | 391-0578 | Clean and autoclave before use |
100 mm plates | Falcon | 351029 | Treated, sterile cell culture dish |
15 mL sterile tubes | Falcon | 352097 | Centrifuge sterile tubes, polypropylene |
22 mm x 22 mm cover glasses | VWR | 631-1570 | Autoclave before use |
25 mL serological pipet | Falcon | 357525 | Sterile, polystyrene |
250 mL laboratory bottle | VWR | 215-1593 | Clean and autoclave before use |
35 mm plates | Falcon | 353001 | Treated, sterile cell culture dish |
5 mL serological pipet | Falcon | 357543 | Sterile, polystyrene |
50 mL sterile tubes | Falcon | 352098 | Centrifuge sterile tubes, polypropylene |
500 mL laboratory bottle | VWR | 215-1594 | Clean and autoclave before use |
60 mm plates | Falcon | 353004 | Treated, sterile cell culture dish |
Ammonium hydroxide (NH4OH) | Sigma- Aldrich | 338818 | Liquid |
Disposable scalpels | VWR | 233-5526 | Sterile and disposable |
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) | Sigma- Aldrich | D6429-500ml | Store at 2-8 °C; avoid exposure to light |
Fetal Bovine Serum (FBS) | Sigma- Aldrich | F9665-500ml | Store at -20 °C. The serum should be aliquoted into smaller working volumes |
Fine forceps | VWR | 232-1317 | Clean and autoclave before use |
Gelatin from porcine skin | Sigma- Aldrich | G1890-100G | Commercial Powder |
Hank's Balanced Salt Solution (HBSS) | Sigma- Aldrich | H1387-1L | Powder |
Large surgical scissors | VWR | 233-1211 | Clean and autoclave before use |
Microdissecting scissors | Sigma- Aldrich | S3146 | Clean and autoclave before use |
Penicillin and Streptomycin | Sigma- Aldrich | P4333-100ml | Store at -20°C. The solution should be aliquoted into smaller working volumes |
Potassium Chloride | Sigma- Aldrich | P9333 | Powder |
Potassium Phosphate Monobasic | Sigma- Aldrich | P5665 | Powder |
Sodium Chloride | Sigma- Aldrich | S7653 | Powder |
Sodium Phosphate Dibasic | Sigma- Aldrich | 94046 | Powder |
Stericup Filters | Millipore | S2GPU05RE | Sterile and disposable 0.22 mm filter membranes |
Triton X-100 | Sigma- Aldrich | 9002-93-1 | Liquid |
Trypsin-EDTA | Sigma- Aldrich | T4049-100ml | Store at -20 °C. It should be aliquoted into smaller working volumes |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved