التأثير العدائي ل Jiawei Shengjiang San على نموذج الفئران لاعتلال الكلية السكري: متعلق بمسار إشارات EGFR / MAPK3 / 1

Summary

هنا ، نقدم بروتوكولا يصف علم الأدوية الشبكي وتقنيات الالتحام الجزيئي لاستكشاف آلية عمل Jiawei Shengjiang San (JWSJS) في علاج اعتلال الكلية السكري.

Abstract

كنا نهدف إلى الخوض في الآليات التي يقوم عليها عمل Jiawei Shengjiang San (JWSJS) في علاج اعتلال الكلية السكري ونشر علم الأدوية الشبكي. باستخدام علم الأدوية الشبكي وتقنيات الالتحام الجزيئي ، توقعنا المكونات والأهداف النشطة ل JWSJS وأنشأنا شبكة "هدف مكون الدواء" الدقيقة. تم استخدام تحليلات إثراء الأنطولوجيا الجينية (GO) وموسوعة كيوتو للجينات والجينومات (KEGG) لتمييز المسارات العلاجية وأهداف JWSJS. تم نشر Autodock Vina 1.2.0 للتحقق من الالتحام الجزيئي ، وتم إجراء محاكاة ديناميكيات جزيئية 100 نانوثانية لتأكيد نتائج الالتحام ، تليها التحقق من في الجسم الحي . كشفت النتائج أن JWSJS تشترك في 227 هدفا متقاطعا مع اعتلال الكلية السكري ، مما أدى إلى بناء طوبولوجيا شبكة تفاعل البروتين والبروتين. يشير تحليل التخصيب KEGG إلى أن JWSJS يخفف من اعتلال الكلية السكري عن طريق تعديل الدهون وتصلب الشرايين ، ومسار إشارات PI3K-Akt ، وموت الخلايا المبرمج ، ومسار إشارات HIF-1 ، مع بروتين كيناز المنشط للميتوجين 1 (MAPK1) ، MAPK3 ، مستقبلات عامل نمو البشرة (EGFR) ، وكيناز بروتين سيرين / ثريونين 1 (AKT1) تم تحديدها كأهداف جماعية لمسارات متعددة. أكد الالتحام الجزيئي أن المكونات الأساسية ل JWSJS (كيرسيتين وحمض بالميتوليك ولوتولين) يمكن أن تثبت التشكل مع ثلاثة أهداف محورية (MAPK1 و MAPK3 و EGFR) من خلال الترابط الهيدروجيني. أشارت الفحوصات في الجسم الحي إلى زيادة ملحوظة في وزن الجسم وانخفاض في بروتين المصل السكري (GSP) ، وكوليسترول البروتين الدهني منخفض الكثافة (LDL-C) ، ويوريدين ثلاثي الفوسفات (UTP) ، ومستويات الجلوكوز في الدم الصائم (FBG) بسبب JWSJS. سلط المجهر الإلكتروني إلى جانب الهيماتوكسيلين والإيوزين (HE) وتلطيخ حمض شيف الدوري (PAS) الضوء على إمكانات كل مجموعة علاجية في التخفيف من تلف الكلى بدرجات متفاوتة ، مما يدل على انخفاضات متنوعة في p-EGFR و p-MAPK3 / 1 و BAX ، وزيادات في تعبير BCL-2 في أنسجة الكلى للفئران المعالجة. بشكل قاطع ، تشير هذه الأفكار إلى أن الفعالية الوقائية ل JWSJS على اعتلال الكلية السكري قد تترافق مع قمع تنشيط مسار إشارات EGFR / MAPK3 / 1 وتخفيف موت الخلايا المبرمج للخلايا الكلوية.

Introduction

داء السكري (DM) هو مرض مزمن يؤثر على أنظمة متعددة ويمكن أن يسبب مضاعفات مختلفة بسبب ارتفاع السكر في الدم المستمر ، مثل اعتلال الكلية السكري (DN) واعتلال الشبكية والاعتلال العصبي¹. DN هو أحد المضاعفات الخطيرة لمرض الكلى DM ، وهو ما يمثل حوالي 30٪ -50٪ من مرض الكلى في المرحلة النهائية (ESRD) ². مظاهره السريرية هي بيلة الزلال الدقيقة ، والتي يمكن أن تتطور إلى ESRD تتميز بزيادة الحجم الكبيبي ، تضخم اللحمة الوسيطة ، والغشاء القاعدي الكبيبي^{السميك 3}. التسبب في DN معقد ولم يتم توضيحه بالكامل. تستخدم الطرق السريرية مثل خفض نسبة الجلوكوز في الدم ، وتنظيم ضغط الدم ، وتقليل ا....

Protocol

تم الحفاظ على جميع واستخدامها وفقا لدليل المجلس القومي للبحوث الأمريكي لرعاية واستخدام المختبر ، الإصدار الثامن ، وتم الإبلاغ عنها على النحو الموصى به في إرشادات REACH^16،17. أجريت الدراسة وفقا لدليل المجلس القومي الصيني للبحوث لرعاية ?.......

Discussion

استخدمت دراستنا مزيجا من علم الأدوية الشبكي ، والالتحام الجزيئي ، والنماذج الحيوانية في الجسم الحي . وتمثلت إحدى الخطوات الحاسمة في إنشاء شبكة "هدف مكون الدواء"، التي كانت حاسمة لتحديد الآليات المحتملة ل JWSJS في معالجة DN، مع التركيز بشكل خاص على تفاعلها مع مسار الإشا?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
2×SYBR Green qPCR Master Mix	Servicebio, Wuhan, China	G3320-05
24-h urine protein quantification (UTP)	Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering	N/A
3,3'-Diaminobenzidine	Shanghai Huzheng Biotech, China	91-95-2
Automatic biochemical analysis instrument	Hitachi, Japan	7170A
Anhydrous Ethanol	Biosharp, Tianjin, China	N/A
BAX Primary antibodies	Affinity, USA	AF0120	Rat
BCL-2 Primary antibodies	Affinity, USA	AF6139	Rat
BX53 microscope	Olympus, Japan	BX53
Chloroform Substitute	ECOTOP, Guangzhou, China	ES-8522
Desmond software	New York, NY, USA	Release 2019-1
Digital Constant Temperature Water Bath	Changzhou Jintan Liangyou Instrument, China	DK-8D
EGFR Primary antibodies	Affinity, USA	AF6043	Rat
Embed-812 RESIN	Shell Chemical, USA	14900
Fasting blood glucose (FBG)	Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering	N/A
FC-type full-wavelength enzyme label analyser	Multiskan; Thermo, USA	N/A
GAPDH  Primary antibodies	Affinity, USA	AF7021	Rat
Glycated serum protein (GSP)	Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering	N/A
Transmission electron microscope	Hitachi, Japan	H-7650
Haematoxylin/eosin (HE) staining solution	Servicebio, USA	G1003
Image-Pro Plus	MEDIA CYBERNETICS, USA	N/A
Real-Time PCR Amplification Instrument	Applied Biosystems, USA	iQ5
Irbesartan tablets	Hangzhou Sanofi Pharmaceuticals	N/A
Isopropanol	Biosharp, Tianjin, China	N/A
JWSJS granules	Guangdong Yifang Pharmaceutical	N/A
Kodak Image Station 2000 MM imaging system	Kodak, USA	IS2000
Low-density cholesterol (LDL-C)	Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering	N/A
MAPK3/1Primary antibodies	Affinity, USA	AF0155	Rat
Medical Centrifuge	Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development, China	TGL-16K
Mini trans-blot transfer system	Bio-Rad, USA	N/A
Mini-PROTEAN electrophoresis system	Bio-Rad, USA	N/A
NanoVue Plus Spectrophotometer	Healthcare Bio-Sciences AB, Sweden	111765
p-EGFR Primary antibodies	Affinity, USA	AF3044	Rat
Periodic acid-Schiff (PAS) staining solution	Servicebio, USA	G1008
p-MAPK3/1 Primary antibodies	Affinity, USA	AF1015	Rat
Secondary antibodies	Santa Cruz, USA	sc-2357	Rabbit
Streptozotocin	Sigma, USA	S0130
SureScript First-Strand cDNA Synthesis Kit	GeneCopeia, USA	QP056T
TriQuick Reagent	Solarbio, Beijing, China	R1100
Ultra-Clean Workbench	Suzhou Purification Equipment, China	SW-CJ-1F