डायबिटिक नेफ्रोपैथी के चूहे मॉडल पर जियावेई शेंगजियांग सैन का विरोधी प्रभाव: EGFR/MAPK3/1 सिग्नलिंग पाथवे से संबंधित

Summary

यहां, हम डायबिटिक नेफ्रोपैथी के इलाज में जियावेई शेंगजियांग सैन (JWSJS) की कार्रवाई के तंत्र का पता लगाने के लिए नेटवर्क फार्माकोलॉजी और आणविक डॉकिंग तकनीकों का वर्णन करने वाला एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।

Abstract

हमने डायबिटिक नेफ्रोपैथी के इलाज और नेटवर्क फार्माकोलॉजी को तैनात करने में जियावेई शेंगजियांग सान (JWSJS) की कार्रवाई को रेखांकित करने वाले तंत्रों में तल्लीन करने का लक्ष्य रखा। नेटवर्क फार्माकोलॉजी और आणविक डॉकिंग तकनीकों को नियोजित करते हुए, हमने JWSJS के सक्रिय घटकों और लक्ष्यों की भविष्यवाणी की और एक सावधानीपूर्वक "ड्रग-घटक-लक्ष्य" नेटवर्क का निर्माण किया। जीन ऑन्कोलॉजी (जीओ) और जीन और जीनोम (केईजीजी) संवर्धन विश्लेषण के क्योटो विश्वकोश का उपयोग जेडब्ल्यूएसजेएस के चिकित्सीय मार्गों और लक्ष्यों को समझने के लिए किया गया था। ऑटोडॉक वीना 1.2.0 को आणविक डॉकिंग सत्यापन के लिए तैनात किया गया था, और डॉकिंग परिणामों की पुष्टि करने के लिए 100-एनएस आणविक गतिशीलता सिमुलेशन आयोजित किया गया था, इसके बाद विवो पशु सत्यापन में। निष्कर्षों से पता चला कि जेडब्ल्यूएसजेएस ने डायबिटिक नेफ्रोपैथी के साथ 227 इंटरसेक्टिंग लक्ष्यों को साझा किया, जो प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन नेटवर्क टोपोलॉजी का निर्माण करता है। KEGG संवर्धन विश्लेषण ने दर्शाया कि JWSJS लिपिड और एथेरोस्क्लेरोसिस, PI3K-Akt सिग्नलिंग मार्ग, एपोप्टोसिस, और HIF-1 सिग्नलिंग मार्ग को संशोधित करके मधुमेह नेफ्रोपैथी को कम करता है, माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन किनेज 1 (MAPK1), MAPK3, एपिडर्मल ग्रोथ फैक्टर रिसेप्टर (EGFR), और सेरीन / थ्रेओनीन-प्रोटीन किनेज 1 (AKT1) को कई मार्गों के सामूहिक लक्ष्य के रूप में पहचाना जाता है। आणविक डॉकिंग ने जोर देकर कहा कि JWSJS (क्वेरसेटिन, पामिटोलिक एसिड और ल्यूटोलिन) के मुख्य घटक हाइड्रोजन बॉन्डिंग के माध्यम से तीन महत्वपूर्ण लक्ष्यों (MAPK1, MAPK3 और EGFR) के साथ रचना को स्थिर कर सकते हैं। विवो परीक्षाओं में शरीर के वजन में उल्लेखनीय वृद्धि और ग्लाइकेटेड सीरम प्रोटीन (जीएसपी), कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन कोलेस्ट्रॉल (एलडीएल-सी), यूरिडीन ट्राइफॉस्फेट (यूटीपी), और जेडब्ल्यूएसजेएस के कारण उपवास रक्त शर्करा (एफबीजी) के स्तर में कमी का संकेत मिला। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी hematoxylin और eosin (एचई) और आवधिक एसिड-शिफ (पीएएस) धुंधला के साथ मिलकर विभिन्न विस्तार करने के लिए गुर्दे की क्षति को कम करने में प्रत्येक उपचार समूह की क्षमता पर प्रकाश डाला, p-EGFR, p-MAPK3/1 में विभिन्न गिरावट का प्रदर्शन, और BAX, और इलाज चूहों के गुर्दे के ऊतकों में BCL-2 अभिव्यक्ति में वृद्धि. विशेष रूप से, इन अंतर्दृष्टि से पता चलता है कि डायबिटिक नेफ्रोपैथी पर JWSJS की सुरक्षात्मक प्रभावकारिता EGFR/MAPK3/1 सिग्नलिंग मार्ग की सक्रियता को दबाने और गुर्दे सेल एपोप्टोसिस को कम करने से जुड़ी हो सकती है।

Introduction

मधुमेह मेलेटस (डीएम) एक पुरानी बीमारी है जो कई प्रणालियों को प्रभावित करती है और निरंतर हाइपरग्लेसेमिया के कारण विभिन्न जटिलताओं का कारण बन सकती है, जैसे कि मधुमेह नेफ्रोपैथी (डीएन), रेटिनोपैथी और न्यूरोपैथी¹. डीएन डीएम की एक गंभीर जटिलता है, जो अंत-चरण गुर्दे की बीमारी (ईएसआरडी)^2के लगभग 30% -50% के लिए जिम्मेदार है। इसकी नैदानिक अभिव्यक्ति माइक्रोएल्ब्यूमिन्यूरिया है, जो ईएसआरडी में प्रगति कर सकती है जो ग्लोमेरुलर वॉल्यूम, मेसांगियल स्ट्रोमल हाइपरप्लासिया और गाढ़ा ग्लोमेरुलर बेसमेंट झिल्ली³ की विशेषता है। डीएन का रोगजनन जटिल है और इसे पूरी तरह से स्पष्ट नहीं किया....

Protocol

सभी जानवरों को बनाए रखा और प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए अमेरिका के राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद गाइड, 8^वें संस्करण के अनुसार इस्तेमाल किया गया, और आगमन दिशा^{निर्देश?.......}

Discussion

हमारे अध्ययन ने नेटवर्क फार्माकोलॉजी, आणविक डॉकिंग और विवो पशु मॉडल में संयोजन को नियोजित किया। एक महत्वपूर्ण कदम "ड्रग-घटक-लक्ष्य" नेटवर्क की स्थापना थी, जो डीएन के इलाज में जेडब्ल्यू?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
2×SYBR Green qPCR Master Mix	Servicebio, Wuhan, China	G3320-05
24-h urine protein quantification (UTP)	Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering	N/A
3,3'-Diaminobenzidine	Shanghai Huzheng Biotech, China	91-95-2
Automatic biochemical analysis instrument	Hitachi, Japan	7170A
Anhydrous Ethanol	Biosharp, Tianjin, China	N/A
BAX Primary antibodies	Affinity, USA	AF0120	Rat
BCL-2 Primary antibodies	Affinity, USA	AF6139	Rat
BX53 microscope	Olympus, Japan	BX53
Chloroform Substitute	ECOTOP, Guangzhou, China	ES-8522
Desmond software	New York, NY, USA	Release 2019-1
Digital Constant Temperature Water Bath	Changzhou Jintan Liangyou Instrument, China	DK-8D
EGFR Primary antibodies	Affinity, USA	AF6043	Rat
Embed-812 RESIN	Shell Chemical, USA	14900
Fasting blood glucose (FBG)	Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering	N/A
FC-type full-wavelength enzyme label analyser	Multiskan; Thermo, USA	N/A
GAPDH  Primary antibodies	Affinity, USA	AF7021	Rat
Glycated serum protein (GSP)	Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering	N/A
Transmission electron microscope	Hitachi, Japan	H-7650
Haematoxylin/eosin (HE) staining solution	Servicebio, USA	G1003
Image-Pro Plus	MEDIA CYBERNETICS, USA	N/A
Real-Time PCR Amplification Instrument	Applied Biosystems, USA	iQ5
Irbesartan tablets	Hangzhou Sanofi Pharmaceuticals	N/A
Isopropanol	Biosharp, Tianjin, China	N/A
JWSJS granules	Guangdong Yifang Pharmaceutical	N/A
Kodak Image Station 2000 MM imaging system	Kodak, USA	IS2000
Low-density cholesterol (LDL-C)	Nanjing Jiancheng Institute of Biological Engineering	N/A
MAPK3/1Primary antibodies	Affinity, USA	AF0155	Rat
Medical Centrifuge	Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development, China	TGL-16K
Mini trans-blot transfer system	Bio-Rad, USA	N/A
Mini-PROTEAN electrophoresis system	Bio-Rad, USA	N/A
NanoVue Plus Spectrophotometer	Healthcare Bio-Sciences AB, Sweden	111765
p-EGFR Primary antibodies	Affinity, USA	AF3044	Rat
Periodic acid-Schiff (PAS) staining solution	Servicebio, USA	G1008
p-MAPK3/1 Primary antibodies	Affinity, USA	AF1015	Rat
Secondary antibodies	Santa Cruz, USA	sc-2357	Rabbit
Streptozotocin	Sigma, USA	S0130
SureScript First-Strand cDNA Synthesis Kit	GeneCopeia, USA	QP056T
TriQuick Reagent	Solarbio, Beijing, China	R1100
Ultra-Clean Workbench	Suzhou Purification Equipment, China	SW-CJ-1F