Cultura de Laboratório e de Campo de Larvas de Lapa Chinelo ( Crepidula fornicata

Summary

O artigo apresenta métodos para cultura larval do gastrópode Crepidula fornicata em um sistema de pequeno volume em escala laboratorial e em um sistema de mesocosmo ambiente-água do mar que pode ser implantado no campo.

Abstract

O molusco gastrópode calipso, Crepidula fornicata, tem sido amplamente utilizado para estudos de biologia, fisiologia e ecologia do desenvolvimento larval. Larvas de veliger chocadas desta espécie foram coletadas por sifonagem em uma peneira após liberação natural por adultos, distribuídas na cultura a uma densidade de 200/L e alimentadas com Isochrysis galbana (cepa T-ISO) a 1 x 10⁵ células/mL. O crescimento da concha e a aquisição de competência para metamorfose foram documentados para larvas irmãs criadas em culturas ventiladas de 800 mL projetadas para equilíbrio ao ar ambiente ou a misturas de gases atmosféricos definidas. Contrastando com essas condições de cultura de laboratório; Dados de crescimento e competência também foram coletados para larvas criadas em um mesocosmo de água do mar ambiente de 15 L localizado em uma população de campo de adultos reprodutivos. As taxas de crescimento e o tempo de competência metamórfica nas culturas de laboratório foram semelhantes aos relatados em estudos publicados anteriormente. As larvas criadas no mesocosmo do campo cresceram muito mais rápido e se metamorfosearam mais cedo do que o relatado em qualquer estudo de laboratório. Juntos, esses métodos são adequados para explorar o desenvolvimento larval sob condições controladas predeterminadas em laboratório, bem como em condições naturais no campo.

Introduction

A lapa deslizante, Crepidula fornicata (Gastropoda: Calyptraeidae), está bem representada na literatura de pesquisa atual e histórica devido à sua utilidade como modelo de desenvolvimento e por causa de seus impactos generalizados como espécie invasora. Ele serviu como um exemplo fundamental do desenvolvimento espiraliano na era clássica da embriologia experimental¹ e experimentou um renascimento de interesse com a aplicação de ferramentas modernas de imagem e genômica para dissecar os mecanismos do desenvolvimento inicial dos lofotrocozoários ^2,3. No outro extremo de sua histó....

Protocol

1. Manobras de rotina para estabelecimento e manutenção de culturas larvais de C. fornicata

NOTA: Este método começa com um galão (3,8 L) de água do mar contendo C. fornicata adulto que acabou de liberar larvas de veliger chocadas. Os adultos podem ser coletados em campo ou obtidos de um fornecedor fornecido na Tabela de Materiais. Os adultos são hermafroditas protândricos que vivem em pilhas de acasalamento com fêmeas sésseis chocand.......

Discussion

Embora as larvas de C. fornicata sejam relativamente fáceis de cultivar em comparação com outras larvas marinhas planctotróficas, a atenção aos fundamentos das boas práticas de cultivo ainda é essencial^17,19. As larvas saudáveis devem começar a se alimentar imediatamente após a eclosão. Isso é facilmente verificado no dia seguinte à eclosão, observando suas entranhas cheias, repletas de células de algas, usando um microscópio de disseca?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bucket, Polyethylene, 7 gallon	US Plastic	16916	for mesocosm
Crepidula fornicata	Marine Biological Laboratory, Marine Resources Center	760	adult broodstock
Hotmelt glue, Infinity Supertac 500	Hotmelt.com	INFINITY IM-SUPERTAC-500-12-1LB	good for bonding polyethylene
Jar, glass, 32 oz, with polypropylene lid	Uline	S-19316P-W	for 800 mL ventilated cultures
Nitex mesh, 236 µm	Dynamic Aqua Supply Ltd.	NTX236-136	for mesocosm
Nut, hex, nylon, 10-32 thread	Home Depot	1004554441	for fastening tubing barbs
Rivets, nylon, blind, 15/64" diameter, 5/32"-5/16" grip range, pack of 8	NAPA auto parts	BK 6652844	4 packs needed per mesocosm
Tubing barb 1/8" x 10-32 thread	US Plastic	65593	2 needed per culture jar
Tubing, polyethylene, 2.08 mm OD	Fisher Scientific	14-170-11G	for ventilating gas stream inside culture jar
Tubing, Tygon, 1/8"x3/16"x1/32"	US Plastic	57810	fits barbs for ventilating cultures