Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

В протоколе изложен осуществимый, надежный и воспроизводимый метод пережатия левой легочной прикорневой мышцы, который может быть использован для изучения ишемии-реперфузионного повреждения легких на мышиных моделях.

Abstract

Ишемическое реперфузионное повреждение (ИРИ) во время трансплантации легкого является основным фактором риска посттрансплантационных осложнений, включая первичную дисфункцию трансплантата, острое и хроническое отторжение и смертность. Усилия по изучению основ IRI привели к разработке надежной и воспроизводимой модели прикорневой фиксации левого легкого у мышей. Эта модель включает в себя хирургическую процедуру, выполняемую у анестезируемой и интубированной мыши. Выполняется левая торакотомия с последующей тщательной мобилизацией легких и рассечением левого легочного воротка. Прикорневой зажим включает в себя обратимое наложение швов на ворота легочной артерии с помощью узла, который останавливает артериальный приток, венозный отток и поток воздуха через левый основной стволовой бронх. Реперфузия инициируется тщательным снятием швов. В текущих исследованиях наша лаборатория использует 30 мин ишемии и 1 ч реперфузии для экспериментальной модели. Однако эти временные периоды могут быть изменены в зависимости от конкретного экспериментального вопроса. Непосредственно перед жертвоприношением можно получить газ артериальной крови из левого желудочка после 4-минутного периода пережатия правой прикорневой мышцы, чтобы убедиться, что полученные значения PaO2 относятся только к поврежденному левому легкому. Мы также описываем метод измерения экстравазации клеток с помощью проточной цитометрии, который включает внутривенное введение меченного флуорохромом антитела, специфичного для изучаемой клетки (клеток) перед жертвоприношением. Затем левое легкое может быть собрано для проточной цитометрии, замороженной или фиксированной, иммуногистохимии со встроенным парафином и количественной полимеразной цепной реакции. Этот метод прикорневого зажима позволяет детально изучить клеточные и молекулярные механизмы, лежащие в основе ИРИ. Репрезентативные результаты свидетельствуют о снижении оксигенации левого легкого и гистологических признаках повреждения легких после прикорневой пережатия. Эта техника может быть легко изучена и воспроизведена персоналом с опытом микрохирургии и без него, что приводит к надежным и стабильным результатам и служит широко используемой моделью для изучения ИРИ легких.

Introduction

ИРИ при трансплантации органов является основным фактором риска развития первичной дисфункции трансплантата и последующих эпизодов отторжения трансплантата 1,2. Во время трансплантации время теплой ишемии определяется как период времени от перекрестного зажима донорской аорты до начала холодной перфузии и от извлечения органа изо льда до имплантации органа. Время хранения в холодильнике определяется как период времени от начала холодной перфузии до извлечения органа изо льда3. Теплая ишемия более вредна для последующей функции органов, чем холодовая ишемия 4....

Protocol

Все исследования были одобрены Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию в Медицинской школе Вашингтонского университета. Животные получали гуманный уход в соответствии с Руководством по уходу за лабораторными животными и их использованию,8-е издан?.......

Representative Results

После пережатия левого прикорневого отверстия парциальное давление оксигенации в артериальной крови (PaO2), относящееся к левому легкому, составляет ~100 мм рт.ст., что значительно ниже по сравнению с ~500 мм рт.ст. после фиктивной торакотомии (рис. 7A, n = 6-7). Следует отмети.......

Discussion

Мы описываем технику прикорневого зажима, которая включает в себя наложение узла на левом вороте, который окклюзирует легочную артерию и вены и бронх, чтобы вызвать теплую ишемию с последующей реперфузией. После прикорневой пережатости левое легкое может быть собрано для различных эк?.......

Acknowledgements

Эта работа не получила специального гранта от какого-либо финансирующего агентства в государственном, коммерческом или некоммерческом секторах.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Medications
10% povidone-iodine solutionAplicareNDC 52380-0126-2For disinfectant
Buprenorphine 1.3 mg/mLFidelis Animal HealthNDC 86084-100-30For pain control
CarprofenCronus PharmaNDC 69043-027-18For pain control
Heparin 1000 units/mLSagentNDC 25021-404-01For obtaining arterial blood
Isoflurane 1%-1.5%Sigma Aldrich26675-46-7For anesthesia
Ketamine hydrochloride 100 mg/mLVedcoNDC 50989-996-06For anesthesia
Puralube Vet eye ointmentMedi-Vet.com11897To prevent eye dessiccation
Xylazine 20 mg/mLAkornNDC 59399-110-20For pain control
Tools and Instruments
Argent High Temp Fine Tip Cautery PenMcKesson231To coagulate blood vessels
Curved mosquito clampFine Science Tools13009-12For surgical procedure
Fine curved forcepsFine Science Tools11274-20For surgical procedure
Fine scissorsFine Science Tools15040-11For surgical procedure
Intubation clamp set-upFine Science Tools18374-44, 18144-30For holding mouse vertically by the tongue during intubation. See Supplementary Figure 1A. 
Magnetic rib retractorsFine Science Tools18200-01, 18200-10For retraction of thoracotomy. Magnetic fixator and retractor should be connected by micro latex tubing below.
Optical Grade Plastic Optical Fiber Unjacketed, 500μmEdmund Optics02-532To make the introducer for the endotracheal tube. See Supplemental Figure 1B. A 1.5-inch length of this optical fiber should have a piece of silk tape secured to one end. It can then be used as an introducer for the endotracheal tube. The end of the introducer should be curves slightly.
Power Pro Ultra clipperOster078400-020-001To clip hair
ScissorsFine Science Tools14370-22For surgical procedure
Small animal heating padK&H Pet ProductsThermo-Peep Heated PadTo maintain normothermia
Small animal ventilatorHarvard Apparatus55-0000For ventilation (TV 0.35 cc, PEEP 1 cm H2O, RR 100-105/min, FiO2 100%)
Spearit Micro Latex Rubber Tubing (1/8 in outside diameter, 1/16 in inside diameter)Amazon.comhttps://www.amazon.com/Rubber-Tubing-CONTINUOUS-Select-Length/dp/B00H4MT7V0?th=1For retraction of thoracotomy
Stat Profile Prime Critical Care Blood Gas AnalyzerNova Biomedicalhttps://novabiomedical.com/prime-plus-critical-care-blood-gas-analyzer/index.php?gad=1&gclid=Cj0KCQjwmICoBhDx
ARIsABXkXlInZX--R3ezBkc304nS_GVGI9Z2T3Esr33
2aM8WGPiUVhicPQZ
Wj2AaAqhDEALw_wcB  
For retraction of thoracotomy
Straight clampFine Science Tools13008-12For surgical procedure
Straight forcepsFine Science Tools91113-10For surgical procedure
Surgical microscopeWild Heerbruggno longer producedFor intubation and surgical procedure; recommend replacement with Leica surgical microscopes
Supplies
½ cc syringe with ½ inch 29G needleMcKesson942665For injecting ketamine/xylazine intraperitoneally
½ inch 31G needle on a 1 cc tuberculin syringeMcKesson16-SNT1C2705For aspiration of arterial blood from left ventricle
1-inch 20G IV catheterTerumoSROX2025CAFor endotracheal tube (ETT)
1-inch silk tapeDurapore3M ID 7100057168To tape ETT to nose and to secure limbs
3/10 cc syringe with 5/16 inch 31G needleMcKesson102-SN310C31516PFor antibody injection into the inferior vena cava
6-0 monofilament suture on a P-10 needleMcKessonS697GXFor closure of thoracotomy, muscle layer, and skin
6-0 silk tieSurgical Specialties LookSP102To make slipknot for hilar clamp
Pointed cotton-tipped applicatorsSolon56225To manipulate lung and for blunt dissection

References

  1. Bharat, A., et al. Immunological link between primary graft dysfunction and chronic lung allograft rejection. Ann Thorac Surg. 86 (1), 189-195 (2008).
  2. Daud, S. A. Impact o....

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved