A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
В протоколе изложен осуществимый, надежный и воспроизводимый метод пережатия левой легочной прикорневой мышцы, который может быть использован для изучения ишемии-реперфузионного повреждения легких на мышиных моделях.
Ишемическое реперфузионное повреждение (ИРИ) во время трансплантации легкого является основным фактором риска посттрансплантационных осложнений, включая первичную дисфункцию трансплантата, острое и хроническое отторжение и смертность. Усилия по изучению основ IRI привели к разработке надежной и воспроизводимой модели прикорневой фиксации левого легкого у мышей. Эта модель включает в себя хирургическую процедуру, выполняемую у анестезируемой и интубированной мыши. Выполняется левая торакотомия с последующей тщательной мобилизацией легких и рассечением левого легочного воротка. Прикорневой зажим включает в себя обратимое наложение швов на ворота легочной артерии с помощью узла, который останавливает артериальный приток, венозный отток и поток воздуха через левый основной стволовой бронх. Реперфузия инициируется тщательным снятием швов. В текущих исследованиях наша лаборатория использует 30 мин ишемии и 1 ч реперфузии для экспериментальной модели. Однако эти временные периоды могут быть изменены в зависимости от конкретного экспериментального вопроса. Непосредственно перед жертвоприношением можно получить газ артериальной крови из левого желудочка после 4-минутного периода пережатия правой прикорневой мышцы, чтобы убедиться, что полученные значения PaO2 относятся только к поврежденному левому легкому. Мы также описываем метод измерения экстравазации клеток с помощью проточной цитометрии, который включает внутривенное введение меченного флуорохромом антитела, специфичного для изучаемой клетки (клеток) перед жертвоприношением. Затем левое легкое может быть собрано для проточной цитометрии, замороженной или фиксированной, иммуногистохимии со встроенным парафином и количественной полимеразной цепной реакции. Этот метод прикорневого зажима позволяет детально изучить клеточные и молекулярные механизмы, лежащие в основе ИРИ. Репрезентативные результаты свидетельствуют о снижении оксигенации левого легкого и гистологических признаках повреждения легких после прикорневой пережатия. Эта техника может быть легко изучена и воспроизведена персоналом с опытом микрохирургии и без него, что приводит к надежным и стабильным результатам и служит широко используемой моделью для изучения ИРИ легких.
ИРИ при трансплантации органов является основным фактором риска развития первичной дисфункции трансплантата и последующих эпизодов отторжения трансплантата 1,2. Во время трансплантации время теплой ишемии определяется как период времени от перекрестного зажима донорской аорты до начала холодной перфузии и от извлечения органа изо льда до имплантации органа. Время хранения в холодильнике определяется как период времени от начала холодной перфузии до извлечения органа изо льда3. Теплая ишемия более вредна для последующей функции органов, чем холодовая ишемия 4....
Все исследования были одобрены Комитетом по институциональному уходу за животными и их использованию в Медицинской школе Вашингтонского университета. Животные получали гуманный уход в соответствии с Руководством по уходу за лабораторными животными и их использованию,8-е издан?.......
После пережатия левого прикорневого отверстия парциальное давление оксигенации в артериальной крови (PaO2), относящееся к левому легкому, составляет ~100 мм рт.ст., что значительно ниже по сравнению с ~500 мм рт.ст. после фиктивной торакотомии (рис. 7A, n = 6-7). Следует отмети.......
Мы описываем технику прикорневого зажима, которая включает в себя наложение узла на левом вороте, который окклюзирует легочную артерию и вены и бронх, чтобы вызвать теплую ишемию с последующей реперфузией. После прикорневой пережатости левое легкое может быть собрано для различных эк?.......
Авторы не сообщают о каких-либо соответствующих разоблачениях.
Эта работа не получила специального гранта от какого-либо финансирующего агентства в государственном, коммерческом или некоммерческом секторах.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Medications | |||
10% povidone-iodine solution | Aplicare | NDC 52380-0126-2 | For disinfectant |
Buprenorphine 1.3 mg/mL | Fidelis Animal Health | NDC 86084-100-30 | For pain control |
Carprofen | Cronus Pharma | NDC 69043-027-18 | For pain control |
Heparin 1000 units/mL | Sagent | NDC 25021-404-01 | For obtaining arterial blood |
Isoflurane 1%-1.5% | Sigma Aldrich | 26675-46-7 | For anesthesia |
Ketamine hydrochloride 100 mg/mL | Vedco | NDC 50989-996-06 | For anesthesia |
Puralube Vet eye ointment | Medi-Vet.com | 11897 | To prevent eye dessiccation |
Xylazine 20 mg/mL | Akorn | NDC 59399-110-20 | For pain control |
Tools and Instruments | |||
Argent High Temp Fine Tip Cautery Pen | McKesson | 231 | To coagulate blood vessels |
Curved mosquito clamp | Fine Science Tools | 13009-12 | For surgical procedure |
Fine curved forceps | Fine Science Tools | 11274-20 | For surgical procedure |
Fine scissors | Fine Science Tools | 15040-11 | For surgical procedure |
Intubation clamp set-up | Fine Science Tools | 18374-44, 18144-30 | For holding mouse vertically by the tongue during intubation. See Supplementary Figure 1A. |
Magnetic rib retractors | Fine Science Tools | 18200-01, 18200-10 | For retraction of thoracotomy. Magnetic fixator and retractor should be connected by micro latex tubing below. |
Optical Grade Plastic Optical Fiber Unjacketed, 500μm | Edmund Optics | 02-532 | To make the introducer for the endotracheal tube. See Supplemental Figure 1B. A 1.5-inch length of this optical fiber should have a piece of silk tape secured to one end. It can then be used as an introducer for the endotracheal tube. The end of the introducer should be curves slightly. |
Power Pro Ultra clipper | Oster | 078400-020-001 | To clip hair |
Scissors | Fine Science Tools | 14370-22 | For surgical procedure |
Small animal heating pad | K&H Pet Products | Thermo-Peep Heated Pad | To maintain normothermia |
Small animal ventilator | Harvard Apparatus | 55-0000 | For ventilation (TV 0.35 cc, PEEP 1 cm H2O, RR 100-105/min, FiO2 100%) |
Spearit Micro Latex Rubber Tubing (1/8 in outside diameter, 1/16 in inside diameter) | Amazon.com | https://www.amazon.com/Rubber-Tubing-CONTINUOUS-Select-Length/dp/B00H4MT7V0?th=1 | For retraction of thoracotomy |
Stat Profile Prime Critical Care Blood Gas Analyzer | Nova Biomedical | https://novabiomedical.com/prime-plus-critical-care-blood-gas-analyzer/index.php?gad=1&gclid=Cj0KCQjwmICoBhDx ARIsABXkXlInZX--R3ezBkc304nS_GVGI9Z2T3Esr33 2aM8WGPiUVhicPQZ Wj2AaAqhDEALw_wcB | For retraction of thoracotomy |
Straight clamp | Fine Science Tools | 13008-12 | For surgical procedure |
Straight forceps | Fine Science Tools | 91113-10 | For surgical procedure |
Surgical microscope | Wild Heerbrugg | no longer produced | For intubation and surgical procedure; recommend replacement with Leica surgical microscopes |
Supplies | |||
½ cc syringe with ½ inch 29G needle | McKesson | 942665 | For injecting ketamine/xylazine intraperitoneally |
½ inch 31G needle on a 1 cc tuberculin syringe | McKesson | 16-SNT1C2705 | For aspiration of arterial blood from left ventricle |
1-inch 20G IV catheter | Terumo | SROX2025CA | For endotracheal tube (ETT) |
1-inch silk tape | Durapore | 3M ID 7100057168 | To tape ETT to nose and to secure limbs |
3/10 cc syringe with 5/16 inch 31G needle | McKesson | 102-SN310C31516P | For antibody injection into the inferior vena cava |
6-0 monofilament suture on a P-10 needle | McKesson | S697GX | For closure of thoracotomy, muscle layer, and skin |
6-0 silk tie | Surgical Specialties Look | SP102 | To make slipknot for hilar clamp |
Pointed cotton-tipped applicators | Solon | 56225 | To manipulate lung and for blunt dissection |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved