Optimisation de la visualisation du transport axonal de la cargaison endogène par microscopie à fluorescence chez Caenorhabditis elegans vivant

Le transport axonal est une condition préalable à la livraison des protéines axonales depuis leur site de synthèse dans le corps cellulaire neuronal jusqu’à leur destination dans l’axone. Par conséquent, la perte du transport axonal altère la croissance et la fonction neuronales. L’étude du transport axonal permet donc d’améliorer notre compréhension de la biologie des cellules neuronales. Avec les récentes améliorations de l’édition du génome CRISPR Cas9, le marquage endogène des cargaisons axonales est devenu accessible, permettant d’aller au-delà de la visualisation du transport basée sur l’expression ectopique. Cependant, le marquage endogène se fait souvent au détriment d’une faible intensité de signal et nécessite des stratégies d’optimisation pour obtenir des données robustes. Ici, nous décrivons un protocole pour optimiser la visualisation du transport axonal en discutant des paramètres d’acquisition et une approche de blanchiment pour améliorer le signal de la cargaison endogène marquée sur un fond cytoplasmique diffus. Nous appliquons notre protocole pour optimiser la visualisation des précurseurs de vésicules synaptiques (SVP) marqués par RAB-3 marqué par protéine fluorescente verte (GFP) afin de mettre en évidence comment l’ajustement fin des paramètres d’acquisition peut améliorer l’analyse de la cargaison axonale marquée de manière endogène chez Caenorhabditis elegans (C. elegans).