אופטימיזציה של ויזואליזציה של הובלה אקסונלית של מטען אנדוגני על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי ב Caenorhabditis elegans חי

הובלה אקסונלית היא תנאי מוקדם להעברת חלבונים אקסונליים מאתר הסינתזה שלהם בגוף התא העצבי ליעדם באקסון. כתוצאה מכך, אובדן הובלה אקסונלית פוגע בגדילה ובתפקוד העצביים. חקר התחבורה האקסונלית משפר אפוא את הבנתנו את הביולוגיה של התא העצבי. עם השיפורים האחרונים בעריכת הגנום של CRISPR Cas9, תיוג אנדוגני של מטענים אקסונליים הפך לנגיש, ומאפשר להתקדם מעבר להדמיה מבוססת ביטוי חוץ רחמי של תחבורה. עם זאת, תיוג אנדוגני מגיע לעתים קרובות במחיר של עוצמת אות נמוכה ומחייב אסטרטגיות אופטימיזציה כדי להשיג נתונים חזקים. כאן, אנו מתארים פרוטוקול כדי לייעל את ההדמיה של תחבורה אקסונלית על ידי דיון בפרמטרים של רכישה וגישה הלבנה כדי לשפר את האות של מטען מסומן אנדוגני על רקע ציטופלזמי מפוזר. אנו מיישמים את הפרוטוקול שלנו כדי למטב את ההדמיה של מבשרי שלפוחית סינפטית (SVPs) המסומנים על ידי חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) המתויג RAB-3 כדי להדגיש כיצד כוונון עדין של פרמטרי רכישה יכול לשפר את הניתוח של מטען אקסונלי מסומן אנדוגנית ב- Caenorhabditis elegans (C. elegans).