A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
הפרוטוקול הנוכחי מתאר אסטרטגיה מעשית לזרז את שלב האימות של קואורדינטות הזרקה סטריאוטקסיות לפני ביצוע מעקב נגיפי באמצעות צבעים ומקטעים קפואים.
הזרקה סטריאוטקסית של אזור מסוים במוח מהווה טכניקה ניסיונית בסיסית במדעי המוח הבסיסיים. חוקרים בדרך כלל מבססים את בחירתם בפרמטרים של הזרקה סטריאוטקסית על אטלסים של מוח עכבר או חומרים שפורסמו שהשתמשו באוכלוסיות/גילאים שונים של עכברים ובציוד סטריאוטקסי שונה, מה שמחייב אימות נוסף של פרמטרי הקואורדינטות הסטריאוטקסיות. היעילות של דימות סידן, מניפולציות כימוגנטיות ואופטוגנטיות מסתמכת על ביטוי מדויק של גנים מדווחים באזור המעניין, הדורש לעתים קרובות מספר שבועות של מאמץ. לכן, זוהי משימה גוזלת זמן אם הקואורדינטות של אזור המוח היעד אינן מאומתות מראש. באמצעות שימוש בצבע מתאים במקום וירוס ויישום קריוסקציה, החוקרים יכולים לצפות באתר ההזרקה מיד לאחר מתן הצבע. זה מאפשר התאמות בזמן כדי לתאם פרמטרים במקרים שבהם קיימים פערים בין אתר ההזרקה בפועל לבין המיקום התיאורטי. התאמות כאלה משפרות באופן משמעותי את דיוק ביטוי הנגיפים באזור המטרה בניסויים הבאים.
כמעט כל הכלים הנוירומודולטיביים המודרניים, כולל רישום סידן in vivo, כלים אופטוגנטיים וכימוגנטיים, דורשים שימוש בקואורדינטות סטריאוטקסיות כדי להתמקד באזור המוח המעניין 1,2,3, ויוצרים את הבסיס למניפולציה עצבית. קואורדינטות סטריאוטקסיות עבור אזורי מוח של עכברים מוגדרות ביחס לברגמה ולמבדה, ציוני הדרך הגרמיים על הגולגולת, ויוצרים את מה שמכונה מערכת קואורדינטות סטריאוטקסית שמקורה בגולגולת. ברגמה או למדא יכולות לשמש כנקודת האפס של הקואורדינטות התלת-ממדיות. שלושת הצירים הם אנטרופוסטריורי (AP), בינוני (ML) ודורסו-ונטרלי (DV), המייצגים את צירי y, x ו-z בתצוגה דיגיטלית של מכשיר....
כל הניסויים בבעלי חיים נערכו בהתאם להנחיות Animal Research Reporting In Vivo Experiments (ARRIVE) ולמדריך המכונים הלאומיים לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. המחקר הנוכחי אושר על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של בית החולים רנג'י, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת ג'יאוטונג בשנחאי. במחקר הנוכחי נעשה שימוש בעכבר.......
מחקר זה זיהה בהצלחה את אתר ההזרקה תוך 30 דקות באמצעות השיטה שהודגמה. בתחילה, תמיסת טעינת דגימות SDS-PAGE המכילה ברומופנול כחול הוזרק לתוך LDTgV בעכברי C57/BL. איור 1A מראה ייצוג סכמטי של הזרקת תמיסת הצבע. התפלגות הצבע הכחול ב-LDTgV מודגמת באיור 1B.
ברומופנול.......
מאמר זה תיאר אסטרטגיה יציבה לאימות הדיוק של זריקות מוח סטריאוטקסיות 5,6 מהר יותר ופשוט לפני מעקב נגיפי, אך ההיבט חסר התחליף של ביטוי גנים מדווח באזור המוח הוא חיוני לתיוג אזור המוח. הצבע הכחול בו השתמשנו איפשר הדמיה מיידית של אתר ההזרקה.
מספר ש?.......
הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס '82101249 ל- XY Sun), קרן המחקר לפוסט-דוקטורט של סין (מענק מס '2022M722125 ל- XY Sun). תוכנית השייט של שנחאי (מענק מס' 21YF1425100 לש.ש. צ'ן). פרויקט מיוחד למחקר קליני של ועדת הבריאות העירונית של שנחאי (מענק מס '202340088 לג'יי ג'ואו). הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס '82101262 ל- X Zhang, מענק מס '82101287 ל- SH Chen).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1.0 µL, Neuros Syringe, Model 7001 KH, 32 G, Point Style 3 | Hamilton | 65458-01 | |
200 μL pipette tips | biosharp | BS-200-T | |
20 mL syringe | Kindly group | ||
3%H2O2 solution | Lircon Company | ||
6-well plate | Shengyou Biotech | 20006 | |
Anerdian | Likang High-tech | 31001002 | |
Anti roll plate | Leica | 14047742497 | |
BD insulin syringe | Becton,Dickinson and Company | 328421 | |
Bend toothed dissecting forceps | Jinzhong | JD1050 | |
Cellsens dimension software | Olympus | ||
Cotton swab | Fisher Scientific | 23-400-122 | |
Dapi-Fluoromount-G | Southernbiotech | 0100-20 | |
Drill | Longxiang | ||
Fine brushes | HWAHONG | ||
Fine scissors | Jinzhong | y00030 | |
Fluorescent microscopy | Olympus | BX63 | |
freezing microtome | Leica | CM1950 | |
Hemostatic forceps straight with tooth | Jinzhong | J31010 | |
Infusion needle 0.7 mm | Kindly group | ||
Lidocaine hydrochloride injection | Harvest Pharmaceutical Company | 71230803 | |
Magnifying glass | M&G Chenguang Stationery | ||
Male C57/BL mice | The Shanghai Institute of Planned Parenthood Research–BK Laboratory | ||
Mice coronal brain slice mold | RWD Life Science | 68713 | |
Microcentrifuge tube | biosharp | BS-02-P | |
Microtome blades | Leica | 819 | |
Ophthalmic ointment | Cisen Pharmaceutical Company | G23HDM9M4S5 | |
paraformaldehyde | Biosharp | BL539A | |
Peristaltic pumps | Harvard Apparatus | 70-4507 | |
Phosphate buffered saline | Servicebio | G4202 | |
Piette 2-200 μL | thermofisher | 4642080 | |
SDS-PAGE sample loading containing bromophenol blue | Beyotime | P0015A | |
Shaving blades | BFYING | 91560618 | |
Slides | Citotest Scientific | 188105 | |
Stereotaxic apparatus | RWD Life Science | 68807 | |
Straight toothed dissecting forceps | Jinzhong | JD1060 | |
Syringe Holder | RWD Life Science | 68206 | |
Tissue scissors | Jinzhong | J21040 | |
Tissue-Tek O.C.T compound | Sakura | 4583 | |
Tribromoethanol | Aibei Biotechnology | M2910 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved