A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
В настоящем протоколе описана практическая стратегия для ускорения этапа верификации координат стереотаксической инъекции перед проведением отслеживания вируса с использованием красителей и замороженных срезов.
Стереотаксическая инъекция в определенную область мозга представляет собой фундаментальный экспериментальный метод в фундаментальной нейробиологии. Исследователи обычно основывают свой выбор параметров стереотаксической инъекции на атласах мозга мышей или опубликованных материалах, в которых использовались различные популяции/возрасты мышей и различное стереотаксическое оборудование, что требует дальнейшей проверки параметров стереотаксических координат. Эффективность визуализации кальция, хемогенетических и оптогенетических манипуляций зависит от точной экспрессии репортерных генов в исследуемой области, что часто требует нескольких недель усилий. Таким образом, это трудоемкая задача, если заранее не проверены координаты целевой области мозга. Используя соответствующий краситель вместо вируса и реализуя криосекцию, исследователи могут наблюдать за местом инъекции сразу после введения красителя. Это способствует своевременной корректировке параметров координат в тех случаях, когда существуют расхождения между фактическим местом введения и теоретическим положением. Такие корректировки значительно повышают точность экспрессии вируса в целевой области в последующих экспериментах.
Почти все современные инструменты нейромодуляции, включая запись кальция in vivo, оптогенетические и хемогенетические инструменты, требуют использования стереотаксических координат для нацеливания на область мозга, представляющую интерес 1,2,3, что составляет основу нейронных манипуляций. Стереотаксические координаты областей мозга мыши определяются по отношению к брегме и лямбде, костным ориентирам на черепе, образуя так называемую стереотаксическую систему координат, производную от черепа. Либо брегма, либо лямбда могут служить нулевой точкой трехмерных координат. ....
Все эксперименты на животных проводились в соответствии с руководящими принципами Animal Research Reporting In Vivo Experiments (ARRIVE) и Руководством Национальных институтов здравоохранения по уходу и использованию лабораторных животных. Настоящее исследование было одобрено Комитетом по уходу за животн?.......
В этом исследовании было успешно идентифицировано место инъекции в течение 30 мин с использованием продемонстрированного метода. Первоначально раствор для загрузки образцов SDS-PAGE, содержащий бромфенольный синий, вводили в LDTgV мышам C57/BL. На рисунке 1А показано схематичес.......
В этой статье описана стабильная стратегия более быстрой и простой проверки точности стереотаксических инъекций в мозг до отслеживания вируса, но незаменимый аспект экспрессии репортерных генов в области мозга имеет решающее значение для маркировки областей мозга.
Национальный фонд естественных наук Китая (грант No 82101249 XY Sun), Фонд постдокторских исследований Китая (грант No 2022M722125 XY Sun). Шанхайская парусная программа (грант No 21YF1425100 для С. Х. Чена). Специальный проект по клиническим исследованиям Шанхайской муниципальной комиссии по здравоохранению (грант No 202340088 компании J Zhou). Национальный фонд естественных наук Китая (грант No 82101262 Х Чжану, грант No 82101287 С. Чэню).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1.0 µL, Neuros Syringe, Model 7001 KH, 32 G, Point Style 3 | Hamilton | 65458-01 | |
200 μL pipette tips | biosharp | BS-200-T | |
20 mL syringe | Kindly group | ||
3%H2O2 solution | Lircon Company | ||
6-well plate | Shengyou Biotech | 20006 | |
Anerdian | Likang High-tech | 31001002 | |
Anti roll plate | Leica | 14047742497 | |
BD insulin syringe | Becton,Dickinson and Company | 328421 | |
Bend toothed dissecting forceps | Jinzhong | JD1050 | |
Cellsens dimension software | Olympus | ||
Cotton swab | Fisher Scientific | 23-400-122 | |
Dapi-Fluoromount-G | Southernbiotech | 0100-20 | |
Drill | Longxiang | ||
Fine brushes | HWAHONG | ||
Fine scissors | Jinzhong | y00030 | |
Fluorescent microscopy | Olympus | BX63 | |
freezing microtome | Leica | CM1950 | |
Hemostatic forceps straight with tooth | Jinzhong | J31010 | |
Infusion needle 0.7 mm | Kindly group | ||
Lidocaine hydrochloride injection | Harvest Pharmaceutical Company | 71230803 | |
Magnifying glass | M&G Chenguang Stationery | ||
Male C57/BL mice | The Shanghai Institute of Planned Parenthood Research–BK Laboratory | ||
Mice coronal brain slice mold | RWD Life Science | 68713 | |
Microcentrifuge tube | biosharp | BS-02-P | |
Microtome blades | Leica | 819 | |
Ophthalmic ointment | Cisen Pharmaceutical Company | G23HDM9M4S5 | |
paraformaldehyde | Biosharp | BL539A | |
Peristaltic pumps | Harvard Apparatus | 70-4507 | |
Phosphate buffered saline | Servicebio | G4202 | |
Piette 2-200 μL | thermofisher | 4642080 | |
SDS-PAGE sample loading containing bromophenol blue | Beyotime | P0015A | |
Shaving blades | BFYING | 91560618 | |
Slides | Citotest Scientific | 188105 | |
Stereotaxic apparatus | RWD Life Science | 68807 | |
Straight toothed dissecting forceps | Jinzhong | JD1060 | |
Syringe Holder | RWD Life Science | 68206 | |
Tissue scissors | Jinzhong | J21040 | |
Tissue-Tek O.C.T compound | Sakura | 4583 | |
Tribromoethanol | Aibei Biotechnology | M2910 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved